雷公藤氯內酯醇通過改善突觸可塑性、調節(jié)Aβ代謝、抑制神經炎癥反應減輕5XFAD轉基因小鼠的認知損害.pdf

1、【目的】β淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)代謝異常是阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)發(fā)病機制的核心環(huán)節(jié)。Aβ的生成和清除失平衡導致其在腦內異常增多并聚集,觸發(fā)了一系列病理生理級聯反應,包括突觸功能障礙、膠質細胞活化誘發(fā)的炎癥反應等,最終導致神經元損傷并引起癡呆。本研究以5XFAD轉基因小鼠為動物模型,觀察雷公藤氯內酯醇(tripchlorolide,T4)對該轉基因小鼠認知功能的影響,并分別從突觸可塑性

2、、Aβ代謝和神經炎癥的角度較為深入的探討T4作用的可能分子機制。
　　【方法】SPF級5月齡雄性5XFAD轉基因小鼠和野生型小鼠,各自分別隨機分為溶媒對照組(0.9％NaCl)、T4處理組(5μg/kg,25μg/kg),每組8~11只,腹腔注射給藥,隔日1次,共60天。
　　1、采用Y迷宮和Morris水迷宮兩種行為學實驗,檢測動物學習記憶功能。
　　2、電鏡下觀察海馬CA1區(qū)突觸超微結構;Western blot法

3、檢測海馬和皮層突觸可塑性相關蛋白synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKIIα/CaMKIIα、p-CREB/CREB和PI3K/Akt/mTOR信號通路中pAkt/Akt、pmTOR/mTOR的表達。
　　3、通過免疫組化、ELISA和Western blot檢測腦內Aβ及其生成和降解的關鍵酶(包括β分泌酶、α分泌酶、NEP和IDE)的表達。
　　4、通過免疫組化觀察腦內小膠質細

4、胞和星形膠質細胞的活化情況,通過Western blot檢測腦內GFAP的表達,利用real-time PCR檢測海馬炎癥介質的mRNA水平。
　　【結果】
　　1、T4可改善5XFAD轉基因小鼠視空間學習記憶障礙。
　　2、T4可改善5XFAD轉基因小鼠海馬突觸超微結構異常,增加腦內突觸可塑性相關蛋白的表達,同時增加pAkt/Akt、pmTOR/mTOR的表達。
　　3、T4能夠減少5XFAD轉基因小鼠腦內Aβ

5、沉積,降低BACE1及其酶切產物sAPP-β、CTF-β的表達,增加NEP的表達,但對APP、CTF-α、ADAM10、ADAM17、IDE的表達無影響。
　　4、T4能夠抑制5XFAD轉基因小鼠腦內小膠質細胞活化,下調炎癥介質IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β、CCL2、NOS2的mRNA水平,但對星形膠質細胞活化無明顯影響。
　　【結論】5XFAD轉基因小鼠存在視空間學習記憶障礙、突觸功能損害、Aβ沉積和神經炎