柴胡疏肝散醇提物對抑郁模型小鼠的行為學(xué)影響及抗抑郁作用機理的研究.pdf

1、抑郁癥是一種常見的心境障礙，以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為。抑郁癥與癌癥及艾滋病并駕齊驅(qū)，被公認(rèn)為是新世紀(jì)的三大疾病。隨著人們工作、生活壓力的增大，抑郁癥患者逐年增加，已經(jīng)成為一個全球性的社會和經(jīng)濟問題，亟待解決。而其發(fā)病機制極其復(fù)雜，國內(nèi)外研究中尚未有確切闡述，以單胺假說為主的各種假說推動著抑郁癥研究的進(jìn)步。
　　柴胡疏肝散(Chaihu shugan powder，CSGS)是具有疏肝理氣的代

2、表方劑，由柴胡、陳皮、川芎、香附、枳殼、白芍、甘草組成，在治療抑郁癥方面已取得較好的臨床療效，但其作用機制尚不明確。傳統(tǒng)的用藥方法為水煎劑或散劑，本課題組前期的工作優(yōu)化了柴胡疏肝散的提取工藝，柴胡疏肝散醇提物有效成分的含量明顯優(yōu)于水提物且物質(zhì)組成也發(fā)生了改變。本實驗采用醇提法制備，通過對抑郁模型小鼠的行為學(xué)指標(biāo)影響、腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物含量的檢測以及部分體內(nèi)體外抗氧化實驗的研究，探討CSGS醇提物對抑郁癥的治療作用及其可能的作用

3、機制。
　　選用昆明種小鼠84只，隨機分為7組:正常組、模型組、水提組（Water formulation group，WF組）、同等柴胡皂苷a含量組（1.6g·kg-1，The same content of saikosaponin a group，SA組）、醇提物(Alcoholformulation group，AF組)4.1，8.2，16.4 g·kg-1劑量組。進(jìn)行以下實驗。
　　1、對抑郁模型小鼠的行為學(xué)指標(biāo)影

4、響
　　采用慢性不可預(yù)見溫和應(yīng)激法(Chronic unpredictable mild stress，CUMS)與慢性束縛應(yīng)激法(Chronic restraint stress，CRS)相結(jié)合復(fù)制小鼠抑郁模型，采用體重增長趨勢、蔗糖飲水試驗、曠野實驗、情緒性行為評分、懸尾實驗、強迫游泳實驗來評價模型是否復(fù)制成功。
　　結(jié)果顯示，CUMS與CRS相結(jié)合可以導(dǎo)致小鼠抑郁:與正常組相比，模型組小鼠體重增長趨勢明顯減慢(P＜0.

5、01);在蔗糖飲水實驗中，模型組小鼠的蔗糖水偏嗜度明顯下降;在曠野實驗中，模型組小鼠水平運動次數(shù)和垂直運動次數(shù)均明顯下降(P＜0.01，P＜0.05);在情緒性行為評分實驗中，模型組小鼠情緒評分較低（P＜0.05）;在懸尾實驗中，模型組小鼠的懸尾不動時間明顯升高（P＜0.01）;在強迫游泳實驗中，模型組小鼠的游泳不動時間明顯升高（P＜0.01）。與模型組相比，水提組、SA組和醇提物4.1，8.2，16.4 g·kg-1劑量組均可改善小鼠

6、的抑郁癥狀(P＜0.05，P＜0.01)，具有劑量相關(guān)性，而且同是8.2g·kg-1的生藥量，與水提物比較，醇提物組小鼠實驗第28天體重明顯高于水提組(P＜0.05)，曠野實驗中水平運動次數(shù)明顯高于水提組(P＜0.05)，強迫游泳實驗中游泳不動時間明顯低于水提組(P＜0.05)。
　　2、對抑郁模型小鼠的腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物含量的影響
　　采用高效液相色譜-電化學(xué)檢測法測定小鼠的腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物含量。其色

7、譜條件為:色譜柱:Hypersil BDS C18(4.6mm×250 mm，5μm);柱溫:40℃;流動相:50 mmol·L-1的乙酸鈉緩沖液（含20 mg·L-1 Na2EDTA，20 mg·L-1辛烷磺酸鈉）-甲醇(90∶10，V/V)，加濃磷酸調(diào)節(jié)至pH3.5;流速:0.8 ml·min-1;電極電勢為+600mV，進(jìn)樣量為10μl。
　　結(jié)果顯示，本造模方法可以導(dǎo)致小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(Norepinep

8、hrine，NE)、多巴胺(Dopamine，DA)、5-羥色胺（Serotonin，5-HT）明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)，代謝物3，4-二羥基苯乙酸（3，4-dihydroxyphenylacetic acid，DOPAC）、5-羥基吲哚乙酸（5-hydroxy-indol-acetic acid，5-HIAA）明顯升高(P＜0.01)，DOPAC/DA及5-HIAA/5-HT明顯升高(P＜0.01)。與模型組相比，各給藥

9、組神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物都有不同程度回調(diào):醇提物8.2，16.4 g·kg-1劑量組DA有顯著差異(P＜0.05);醇提物16.4 g·kg-1劑量組5-HT有顯著差異(P＜0.01);各給藥組DOPAC均有顯著差異(P＜0.01，P＜0.05);水提組與醇提物8.2 g·kg-1劑量組5-HIAA有顯著差異(P＜0.05);除SA組外，各給藥組DOPAC/DA及5-HIAA/5-HT均顯著下降(P＜0.01，P＜0.05)。
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10、、對抑郁模型小鼠肝組織SOD、CAT酶活性的影響
　　采用紫外-可見分光光度法檢測小鼠肝組織中氧化酶活性。檢測超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)采用鄰苯三酚法，檢測過氧化氫酶(Catalase，CAT)采用鉬酸銨法。
　　結(jié)果顯示，本造模方法可以導(dǎo)致小鼠肝組織SOD、CAT活性顯著下降(P＜0.01)。與模型組相比，醇提物8.2，16.4 g·kg-1劑量組SOD活性顯著升高(P＜0.01)，

11、各給藥組CAT活性均顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)。與水提物相比，醇提物8.2 g·kg-1劑量組兩種酶活性均較高(P＜0.05，P＜0.01)。
　　4、體外抗氧化能力的測定
　　采用紫外-可見分光光度法檢測醇提物的體外抗氧化能力。分別檢測DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)、

12、·OH(Hydroxyl radical)、O2-·(Superoxideanion radical)，并用維生素C(Vitamin C，Vc)作為陽性對照。
　　結(jié)果顯示，CSGS醇提物的IC50分別為0.75μg·ml-1(DPPH)、35.01mg·mL-1(·OH)、52.17 mg·ml-1(O2-·);Vc的IC50分別為5.79μg·ml-1(DPPH)、0.108 mg·ml-1(·OH)、0.152 mg·ml-