蒲公英水提物對豬鏈球菌生物被膜體外干預(yù)作用.pdf

1、豬鏈球菌病是由豬鏈球菌(Streptococcus suis)引起的一種常見傳染病，豬鏈球菌在機(jī)體內(nèi)易形成生物被膜，抵抗宿主免疫系統(tǒng)的清除，可以持續(xù)性定植，引起慢性反復(fù)性感染，難以控制。蒲公英(Dandelion)是一種常見的清熱解毒中藥，其主要活性成分為綠原酸，具有廣譜的抗菌消炎作用。通過蒲公英提取物對體外豬鏈球菌干預(yù)，探討蒲公英對豬鏈球菌的抗菌作用及對生物被膜形成的干預(yù)作用，為蒲公英防治豬鏈球菌病及其作用機(jī)制提供依據(jù)。
　　試

2、驗(yàn)方法:采取L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法，以水和乙醇作為蒲公英的提取溶劑，抑菌效果為參照，水提考察料液比、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)三因素對提取抑菌活性成分的影響;醇提考察料液比、乙醇濃度、pH三因素對提取抑菌活性成分的影響，最終確定蒲公英抑菌成分的最佳提取工藝。對抑菌活性高的提取組分，以綠原酸為對照品，利用高效液相色譜對其提取物中綠原酸含量進(jìn)行測定。通過微量肉湯稀釋法分別測定蒲公英提取物和綠原酸對豬鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MB

3、C)。應(yīng)用卡爾加里生物被膜形成裝置，采用結(jié)晶紫染色(CV)，利用酶標(biāo)儀測定豬鏈球菌生物被膜的形成能力。采用1/2、1/4、1/8、1/16、1/32MIC蒲公英提取物及1/2、1/4、1/8、1/16、1/32MIC綠原酸對豬鏈球菌生物被膜形成進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)，測定二者對豬鏈球菌生物被膜形成是否有干預(yù)作用;應(yīng)用掃描電鏡(SEM)檢測蒲公英提取和綠原酸對豬鏈球菌生物被膜形成的形態(tài)學(xué)影響。
　　試驗(yàn)結(jié)果:采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法，優(yōu)化蒲

4、公英提取物對豬鏈球菌抑菌效果最好的提取工藝，蒲公英最佳提取工藝是料液比為1∶15，煎煮時(shí)間為30min，煎煮次數(shù)為3次，提取的綠原酸含量為5.833mg·mL-1。蒲公英水提物對豬鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小抑菌濃度(MBC)分別為62.5 mg·mL-1和250mg·mL-1。綠原酸對豬鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)分別為和2.5mg·mL-1和10mg·mL-1。掃描電鏡觀察可見陰性對照組細(xì)菌鑲嵌于生