人腦原發(fā)性膠質(zhì)瘤中ATM、ATR、Chk1和Chk2基因表達研究.pdf

1、目的：檢測 ATM（Ataxia-telangiectasia mutated gene）、ATR（ATM and Rad3-related gene）、Chk1（checkpoint kinase1）和Chk2（checkpoint kinase2）基因在不同病理級別人腦原發(fā)性膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的定量表達分析，研究這些基因的表達水平與人腦原發(fā)性膠質(zhì)瘤的發(fā)生、進展的關(guān)系。
　　 方法：臨床收集35例人腦原發(fā)性膠質(zhì)瘤組織（W

2、HO標準分級：Ⅱ級12例、Ⅲ級9例、Ⅳ級14例）和10例正常腦組織。其中，選取了10例兒童腦膠質(zhì)瘤（年齡為7-16歲，病理類型均為兒童髓母細胞瘤）。軟件設計內(nèi)參基因GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）和4個基因（ATM、ATR、Chk1和Chk2）的引物。使用SYBR Green實時定量PCR技術(shù)，于7900HT熒光定量PCR儀上對所有標本實時定量PCR檢測目的基因及內(nèi)參基因的mRNA表達情況，采用SDS2.2圖像分析軟件進行處理，通過

3、ΔCt法（ΔCt值表示基因反應產(chǎn)物的熒光值達到設定的域值時的反應循環(huán)數(shù)，目的基因表達值=2Ct（GAPDH）-Ct（目的基因））對最后的結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)合臨床資料分析ATM、ATR、Chk1和Chk2基因在不同病理級別人腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的mRNA表達情況，分析兒童髓母細胞瘤與正常腦組織中這4個基因的表達差異，觀察各基因在不同性別組和不同年齡組中的表達差異。
　　 結(jié)果：與正常腦組織相比，ATM基因表達量在各級腦膠

4、質(zhì)瘤中無顯著變化（P>0.05），ATR，Chk1和Chk2基因在Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤中表達上調(diào)（P<0.05），且隨著腫瘤組織的病理級別增加，表達量逐漸升高。其中Chk1在Ⅳ級膠質(zhì)瘤中的表達比Ⅱ級、Ⅲ級顯著升高（P<0.05）。兒童髓母細胞瘤中ATM、ATR、Chk1和Chk2基因的表達均較正常組織有所上升，ATR、Chk2表達量相對正常組織有顯著增高（P<0.01）。結(jié)合臨床資料，細胞周期調(diào)控基因在不同性別組和不同年齡組中的表達

5、無明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：ATR，Chk1和Chk2系與DNA損傷修復有關(guān)的細胞周期調(diào)控檢控點基因，它們在人腦原發(fā)性膠質(zhì)瘤中的表達上調(diào)，且其表達量隨著腫瘤惡性程度的增加而增加，說明這些基因的過量表達與人腦原發(fā)性膠質(zhì)瘤的發(fā)生密切相關(guān)。Chk1基因在Ⅳ級膠質(zhì)瘤中的表達量比Ⅱ級、Ⅲ級顯著升高，提示Chk1基因表達與腫瘤惡性程度有關(guān)，可用來作為判別膠質(zhì)瘤的病理級別的輔助指標之一。在兒童髓母細胞瘤中，ATR和Chk2基因的