miR-27a作為前列腺癌早期診斷標(biāo)志物的初步研究.pdf

1、目的:
　　檢測(cè)前列腺炎、前列腺良性增生、前列腺癌中雄激素、PSA、MiRNA-27a的含量,并分析三者的相關(guān)性,探討MiRNA-27a含量與前列腺癌各臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　材料和方法:
　　收集男性前列腺炎患者18-65歲(標(biāo)記為 A組對(duì)照組,60例)、良性前列腺增生患者年齡≥50歲(標(biāo)記為B組實(shí)驗(yàn)1組,60例)、確診前列腺癌(I-IV)患者年齡≥50歲(標(biāo)記為C組實(shí)驗(yàn)2組,34例)手術(shù)前血清,以及前列腺癌患

2、者手術(shù)后血清,各組患者均為初治,既往未行放化療,年齡≥50歲,腫瘤分期按AJCC最新標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行,前列腺炎患者分別行血常規(guī)、生化、PSA、腹部超聲、直腸指診查證無(wú)異常,并且既往沒有惡性腫瘤史;運(yùn)用 RT-PCR檢測(cè)血液和組織標(biāo)本中的MiRNA-27a,以及采用放射免疫試劑盒檢測(cè)雄性激素,ELISA技術(shù)檢測(cè)PSA,分析三者之間的相關(guān)性以及與臨床特征之間的相關(guān)性。
　　VCaP前列腺癌細(xì)胞和素抑制后VCaP前列腺癌細(xì)胞:均使用含10％胎牛

3、血清的DMEM培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),培養(yǎng)至穩(wěn)定傳代處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,利用激素抑制激素處理VCaP前列腺癌細(xì)胞;采用MTT細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)激素抑制后 VCaP前列腺癌細(xì)胞后細(xì)胞的增值率;采用 Annexin-V/PI法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)激素抑制后前列腺癌細(xì)胞后細(xì)胞的凋亡率;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)激素抑制后 VCaP前列腺癌細(xì)胞后細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力;Transwell試驗(yàn)檢測(cè)激素抑制后前列腺癌細(xì)胞后細(xì)胞的遷移侵襲能力;RT-PCR檢測(cè)激素抑制

4、后VCaP前列腺癌細(xì)胞后MiRNA-27a的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.前列腺癌患者(I-IV期)較之非前列腺癌患者(包括正常人和前列腺炎、前列腺增生)MiRNA-27a有明顯改變(P<0.01);
　　2.在前列腺癌患者(I-IV期)中,MiRNA-27a與年齡(| r|=0.7541)、TNM分期(| r|=0.9663)、前列腺腫瘤大小(| r|=0.9216)相關(guān)系數(shù)均大于0.7,說明MiRNA-27a與以上指

5、標(biāo)之間有高度的線性正相關(guān)關(guān)系;
　　3. PSA處于灰區(qū)(4ng/ml≤PSA≤10ng/ml)中的MiRNA-27a含量在前列腺癌組和非前列腺癌組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;
　　4.對(duì)雄激素依賴性前列腺癌細(xì)胞株 VCap進(jìn)行激素含量干預(yù)實(shí)驗(yàn),抑制其MiRNA-27a的表達(dá),結(jié)果表明細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制,增值率降低,凋亡率上升,運(yùn)動(dòng)能力下降,侵襲性下降。
　　結(jié)論:
　　1.在前列腺癌患者(I-IV)中,MiRNA-27a濃

6、度和腫瘤分期及前列腺癌組織的大小有正相關(guān),在前列腺癌和非前列腺癌患者之間MiRNA-27a有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;
　　2.對(duì)PSA處于灰區(qū)的前列腺患者而言,MiRNA-27a是一種靈敏度和特異性均較好的新指標(biāo),在有限的病例里,MiRNA-27a的改變和病理結(jié)果符合率達(dá)到100%;
　　3. MiRNA-27a的含量變化可以提高PSA處于灰區(qū)的無(wú)癥狀前列腺癌患者的早期發(fā)現(xiàn);
　　4.抑制雄激素(睪酮),可明顯降低激素依賴性