納米金放大SPR技術(shù)檢測前列腺癌腫瘤標志物free PSA.pdf

1、表面等離子體激元共振(surface plasmon resonance，SPR)是一種基于芯片表面折射率變化的光學(xué)檢測技術(shù)，具有快速、靈敏、免標記等優(yōu)點，可實時在線地跟蹤固液界面反應(yīng)，在蛋白及核酸等生物分子檢測方面具有廣闊的應(yīng)用前景。但是，傳統(tǒng)的SPR檢測方法難以檢測低分子量、超低濃度的生物分子。納米金具有密度大、介電常數(shù)大、良好的生物相容性等特點，因此，基于納米金放大的SPR技術(shù)既可以保持生物分子的生物活性，又可以有效突破傳統(tǒng)SPR

2、中檢測限的限制。游離前列腺特異性抗原(free prostate-specific antigen，f-PSA)是一種常用于前列腺癌早期診斷的標志物，但由于其在血清中的濃度非常低，給前列腺癌的早期診斷造成困難。本文利用基于納米金放大的SPR技術(shù)，設(shè)計兩種免疫模式(夾心型、競爭型)實現(xiàn)了f-PSA的超靈敏檢測。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用溶膠方法合成了一系列不同尺寸(15 nm、20 nm、30 nm、40 nm)的納米金，

3、利用透射電鏡和紫外表征技術(shù)，證實了納米金具有粒徑可控、形貌均勻、穩(wěn)定性好等特點。制備20nm金標f-PSA抗體(Au-anti-f-PSA)和金標f-PSA(Au-f-PSA)，利用熒光和紫外的方法確定了最佳標記條件：anti-f-PSA和f-PSA的濃度分別為2μg/mL、0.3125μg/mL，anti-f-PSA和f-PSA與納米金摩爾比分別為21:1、16:1。⑵利用納米金放大SPR技術(shù)，建立兩種檢測模式(夾心型、競爭型)檢測f

4、-PSA。夾心型檢測模式能夠成倍的放大SPR信號，但是其檢測下限僅為1ng/mL。競爭型檢測模式首先在金膜表面在線組裝單層anti-f-PSA，然后依次注入f-PSA、Au-f-PSA復(fù)合物，通過檢測放大的_Au-f-PSA復(fù)合物的SPR信號實現(xiàn)對f-PSA的檢測。當(dāng)f-PSA濃度極低時，anti-f-PSA單層上存在很多未結(jié)合的位點與Au-f-PSA反應(yīng)，從而產(chǎn)生極大的SPR信號，因此，競爭型檢測模式特別適用于低濃度檢測。Au-f-P