自體激活雪旺細胞與人胚胎神經(jīng)干細胞聯(lián)合移植治療脊髓損傷的研究.pdf

1、[目的] 通過觀察Wistar成鼠自體激活雪旺細胞和人胚神經(jīng)干細胞在體外培養(yǎng)的生長特性及相互作用，將上述兩種細胞移植入大鼠脊髓急性損傷部位，對脊髓損傷恢復情況進行行為學、神經(jīng)電生理學和組織學評價，探討雪旺細胞與神經(jīng)干細胞在脊髓損傷修復過程中所起的作用，并評價該治療方法的效果。 [方法] 分別從Wistar成鼠股神經(jīng)和人胚胎腦皮層中體外分離獲得原代自體激活雪旺細胞和神經(jīng)干細胞，進行純化和體外傳代培養(yǎng)。待神經(jīng)干細胞穩(wěn)定傳4代后，

2、進行神經(jīng)巢蛋白(Nestin)免疫熒光染色以鑒定神經(jīng)干細胞。將兩種細胞共培養(yǎng)。同時建立大鼠脊髓損傷動物模型，并將40只Wistar成鼠(雌性，體重200±30g)分為4組：空白對照組；自體激活雪旺細胞移植組；神經(jīng)干細胞移植組；神經(jīng)干細胞聯(lián)合自體激活雪旺細胞移植組。將預先準備好的DMEM；雪旺細胞；神經(jīng)干細胞；共培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞和雪旺細胞，分別對應于上述4組移植實驗動物的脊髓損傷部位。術(shù)后每周對患肢進行功能評價。12周后每組隨機選擇2只動

3、物進行10％BDA神經(jīng)順行示蹤標記，標記2周后(術(shù)后14周)處死動物。取出動物損傷段脊髓作5μm快速冰凍切片后，進行Cy3熒光染色、熒光免疫組化及HE染色，染色切片經(jīng)顯微圖像分析軟件Imageproplus分析處理。脊髓損傷術(shù)后每周每組隨機選取5只大鼠采用NICOLETVikingIVB型肌電圖儀進行體感誘發(fā)電位(Somatosensoryevokedpotential,SEP)檢查，計算出修復后的神經(jīng)電興奮的傳導速度，與正常鼠比較求比

4、值。采用方差分析(ANOVA)及SNK-q進行統(tǒng)計學分析。 [結(jié)果] 從人胚胎腦皮層及成鼠體內(nèi)分離獲得的神經(jīng)干細胞和自體激活雪旺細胞經(jīng)分離純化后在體外穩(wěn)定傳4代，神經(jīng)巢蛋白(Nestin)免疫熒光染色陽性，雪旺細胞鏡下從形態(tài)上即可確定。 人胚胎神經(jīng)干細胞和自體激活雪旺細胞共培養(yǎng)生長良好。術(shù)后混合細胞移植組和雪旺細胞移植組大鼠后肢感覺和運動功能恢復較另外二組明顯；BDA順行示蹤，HE染色、熒光免疫組化染色顯示混合細胞移植