果梅nSSR、cpSSR引物在核果類果樹上通用性分析及其在果梅遺傳多樣性上的應(yīng)用.pdf

1、核果類果樹包括桃、李、梅、杏、櫻桃等，在我國和世界果樹生產(chǎn)中占有重要地位.果梅原產(chǎn)于中國，是南方重要的出口創(chuàng)匯樹種之一.本研究利用正交設(shè)計優(yōu)化了果梅SSR反應(yīng)體系。對來自果梅上的核微衛(wèi)星引物和葉綠體微衛(wèi)星引物在核果類果樹中進(jìn)行了通用性分析，并利用nSSR引物和cpSSR引物對果梅品種進(jìn)行了遺傳多樣性分析。 1、為建立適宜果梅的SSR反應(yīng)體系，以果梅品種‘紅農(nóng)’為材料，利用正交設(shè)計對Mg2+、Taq酶、引物、模板DNA和dNTPs

2、等5種因素4個水平進(jìn)行篩選和優(yōu)化。結(jié)果表明：20pL反應(yīng)體系中，Mg2+，引物和dNTPs的最適濃度為1.875 mmol.L-1、0.375μmol.L-1、0.125mmol.L-1，Taq酶宜加入0.75U，模板DNA應(yīng)加入15—30 ng；引物D07的最佳退火溫度為50.0℃。 2、用來自果梅的17對nSSR引物和13對cpSSR引物，對核果類桃、李，梅、杏、櫻桃5個樹種的24個品種進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，有13對nSSR引物

3、和13對cpSSR引物得到多態(tài)性擴(kuò)增，分別占所用引物的76.5％和100％，平均PIC值分別為0.591和0.654，有9對nSSR和11對cpSSR引物呈現(xiàn)高多態(tài)性，可以直接作為核果類基因組學(xué)和遺傳育種的研究的有效分子標(biāo)記，可見果梅SSR引物在核果類果樹上具有較好的通用性。 3、利用9對nSSR和9對cpSSR引物對29個果梅品種進(jìn)行了遺傳多樣性分析，一共擴(kuò)增出93個位點，平均每對引物擴(kuò)增出5.2個位點，擴(kuò)增條帶的多態(tài)性百分率