博白大果油茶遺傳多樣性的ISSR研究.pdf

1、博白大果油茶(Camellia gigantocarpa Hu et Huang)是山茶科山茶屬常綠喬木，產于廣西省博白縣。博白大果油茶樹形優(yōu)美，花大果大，其種子含油豐富，是很有價值的觀賞植物和油料植物。因森林不斷遭到砍伐和破壞，博白大果油茶野生資源數量稀少。本研究首次利用ISSR分子標記對4個博白大果油茶種群進行遺傳多樣性分析，為合理開發(fā)和有效利用博白大果油茶資源提供科學的指導和依據。
　　 本研究采用改良CTAB法、改良SD

2、S法及試劑盒法提取博白大果油茶基因組DNA，進行綜合比較后確定提取博白大果油茶DNA的最佳方法是試劑盒法，該方法無論提取博白大果油茶的幼葉還是成熟葉均能得到純度較高的基因組DNA。
　　 采用單因素實驗設計和正交設計對影響PCR反應體系的主要成分及PCR擴增程序進行優(yōu)化，建立了穩(wěn)定的、可重復的博白大果油茶ISSR—PCR擴增反應體系：在20ul的反應體系中，Mg2+濃度為2．5mmol/L，模板DNA用量為20ng，Taq DN

3、A聚合酶為1．75U，dNTPs濃度為0．25 mmol/L，引物濃度為0．6 mmol/L。擴增程序為：94℃預變性4min，94℃變性30s，52℃退火45s，72℃延伸90s，進行35個循環(huán)，72℃延伸7min，4℃保存。
　　 利用最佳ISSR反應體系和擴增程序，從100條引物中篩選出10條多態(tài)性高、重復性好的引物，對42個博白大果油茶樣品進行ISSR擴增，共擴增出115條清晰可重復的DNA條帶，其中98條多態(tài)性條帶。每

4、個引物可擴增的多態(tài)性條帶長度范圍為220～2000bp，多態(tài)性條帶數目在7～13條，多態(tài)條帶百分率為85．22％，說明博白大果油茶存在著豐富的遺傳多樣性。
　　 通過PopGen32軟件統(tǒng)計結果顯示，博白大果油茶4個種群間平均有效等位基因數為1．5637，平均Nei’s基因多樣性指數為0．3230，平均Shannon信息指數為0．4766，表明博白大果油茶總的遺傳多態(tài)性較高。4個種群間具有較高的遺傳分化(Gst)為0．2949，

5、但仍有70．51％的遺傳變異保存于居群內。博白大果油茶4個種群間基因流(Nm)為1．1954，大于1，表明居群間存在一定的基因流動，足以抵制遺傳漂變的作用。
　　 根據遺傳一致度進行UPGMA聚類得到4個種群的聚類圖，結果表明：湖南省新寧縣與湖南省植物園聚為一類，他們的親緣關系最近，遺傳一致度為0．8946；廣西省博白縣那林鎮(zhèn)與廣西省博白縣江寧鎮(zhèn)聚為一類，其遺傳一致度為0．8836；湖南的兩個種群與廣西省博白縣兩種群具有很近的親