雙歧和芽孢桿菌屬雙重FQ-PCR建立及SE感染鴨腸道6種優(yōu)勢(shì)菌動(dòng)力學(xué).pdf

1、本研究建立了檢測(cè)雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬的雙重實(shí)時(shí)熒光定量PCR(MultiplexrealtimeFluorescencelouenceQuantitativePCR，MultiplexFQ-PCR)方法，并運(yùn)用已建立的檢測(cè)雙歧桿菌、芽孢桿菌、腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌和乳酸桿菌屬實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)方法對(duì)經(jīng)SE不同途徑感染的鴨腸道(十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸)內(nèi)上述六種菌屬進(jìn)行定量研究，獲如下結(jié)果： 1.建

2、立了定量檢測(cè)雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬的雙重實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，其靈敏度分別達(dá)到9CFU/ml和6CFU/ml，具有良好特異性，運(yùn)用該方法對(duì)健康雛鴨腸道內(nèi)雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬進(jìn)行定量檢測(cè)，證明其具有較好的實(shí)用性。 2.FQ-PCR對(duì)SE感染雛鴨后其腸道內(nèi)雙歧桿菌、芽孢桿菌、腸球菌、大腸桿菌、葡萄球菌和乳酸桿菌屬的定量檢測(cè)結(jié)果及其變化規(guī)律如下： (1)SE感染雛鴨后，其腸道內(nèi)雙歧桿菌屬含量檢測(cè)結(jié)果呈明顯減少趨勢(shì)。經(jīng)皮下注

3、射感染后12h-6d，其含量都顯著低于健康鴨(P＜0.01)；在滴鼻感染后24h-9d都顯著低于健康鴨水平(P＜0.05)；經(jīng)口服感染后12h-9d，其含量都顯著低于健康鴨(P＜0.05)；在滴鼻和口服感染后6-9d，該菌屬含量在各個(gè)腸段中出現(xiàn)回升，只有口服感染后十二指腸內(nèi)的增加具有顯著性(P＜0.05)，但仍然低于健康鴨。 (2)定量結(jié)果顯示，7-16d雛鴨腸道中芽孢桿菌屬定植量都較低。就檢測(cè)率而言，SE感染后各腸段內(nèi)芽孢桿菌

4、低于健康鴨，在十二指腸內(nèi)，健康鴨該菌屬的檢測(cè)率為7/12，經(jīng)皮下注射感染后檢測(cè)率低至1/11。在空腸和回腸中，分別在皮下注射感染后4-8h和24h-6d不能正常檢測(cè)出該菌或者檢測(cè)的量較低：在十二指腸和盲腸內(nèi)，健康鴨該菌屬的檢測(cè)率分別為7/12和8/12，經(jīng)滴鼻感染后檢測(cè)率分別低至4/12和1/12；在盲腸內(nèi)，健康鴨該菌屬的檢測(cè)率為8/12，口服感染后檢測(cè)率低至3/12；在感染后36h，空腸內(nèi)芽孢桿菌數(shù)量顯著低于健康鴨(P＜0.01)。

5、 (3)距感染雛鴨后，其十二指腸內(nèi)腸球菌數(shù)量的主要變化趨勢(shì)表現(xiàn)為增加，尤其在皮下注射感染后4-36h(P＜O＜05)，口服感染后12-36h，以及滴鼻感染后4-36h，分別在三種途徑感染后的24h(P＜0.01)，12h(P＜0.01)和24h(P＜0.01)達(dá)到峰值；但在皮下注射感染后48h(P＜0.05)呈明顯的遞減趨勢(shì)，以后逐漸恢復(fù)至初始水平；直腸內(nèi)腸球菌含量變化也以增加趨勢(shì)為主，在皮下注射感染后的4-48h(P＜0.05)

6、，在滴鼻感染后的8-36h(P＜0.05)，在口服感染后的24-36h(P＜0.05)都顯著高于健康鴨水平，隨后也緩慢恢復(fù)初始水平。其他腸段內(nèi)腸球菌數(shù)量以減少趨勢(shì)為主。 (4)SE感染雛鴨后，其腸道內(nèi)大腸桿菌屬含量檢測(cè)結(jié)果呈明顯增加趨勢(shì)。經(jīng)皮下注射感染后，回腸和盲腸內(nèi)該菌在感染后8-48h顯著高于健康鴨水平(P＜0.05)；經(jīng)滴鼻感染后，十二指腸內(nèi)該菌在4-8h(P＜0.05)和36h(P＜0.05)顯著高于健康鴨水平，空腸內(nèi)該

7、菌數(shù)量在4h(P＜0.05)、8h(P＜0.05)、36h(P＜0.05)和72h(P＜0.01)顯著增加；經(jīng)口服感染后空腸內(nèi)該菌數(shù)量在48h(P＜0.05)顯著增加，盲腸內(nèi)該菌數(shù)量在感染后8-72h顯著高于健康鴨水平(P＜0.05)。 (5)SE經(jīng)滴鼻和皮下注射感染雛鴨后，其腸道內(nèi)葡萄球菌屬含量檢測(cè)結(jié)果呈增加趨勢(shì)，但口服感染后呈波狀趨勢(shì)。經(jīng)皮下注射感染后4-8h和24-36h表現(xiàn)為增加趨勢(shì)，分別在感染后4h(P＜0.05)和2

8、4h(P＜0.05)出現(xiàn)兩個(gè)峰值，但在感染后6d各腸段中數(shù)量都低于健康鴨水平；經(jīng)滴鼻感染后24-72h高于健康鴨水平；經(jīng)口服感染后十二指腸內(nèi)該菌數(shù)量在24h(P＜0.05)和6d(P＜0.05)出現(xiàn)兩個(gè)最低值，空腸內(nèi)該菌數(shù)量在8h(P＜0.05)顯著增加，6d(P＜0.05)出現(xiàn)最低值；回腸和盲腸內(nèi)該菌數(shù)量在4h降低，8-36h出現(xiàn)顯著增長(zhǎng)，但在感染后6-9d各腸段中數(shù)量都趨于健康鴨水平。 (6)SE感染雛鴨后，其回腸和盲腸內(nèi)乳