手足口病RT-PCR和FQ-PCR檢測方法比較及亳州市流行特征研究.pdf

1、目的：手足口病(Hand-foot-mouth Disease,HFMD)是由多種腸道病毒感染引起的常見感染病,多于發(fā)嬰幼兒。其中最常見的是腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A16(CA16),可出現(xiàn)發(fā)熱和手、足皮膚皰疹,口腔咽峽黏膜潰瘍。手足口病為自限性疾病,多數(shù)患者感染后預(yù)后良好,少數(shù)患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等較嚴(yán)重病變,有的患者甚至?xí)劳觥?br>　　近年來,世界各地均不斷有手足口病暴發(fā)流行的報(bào)道,引起嚴(yán)重并發(fā)

2、癥,甚至死亡,已成為全球性的公共衛(wèi)生問題。2008年,中國多個(gè)地區(qū)暴發(fā)手足口病疫情,全國累計(jì)報(bào)告手足口病近25000例,其中34名兒童死亡。2009年4月初,僅山東省就有累計(jì)報(bào)告手足口病例11489例,重癥病例260余例,死亡病例15例,疫情仍在不斷發(fā)展。2010年,全國手足口發(fā)病官方報(bào)道數(shù)字就達(dá)到177萬多。
　　亳州是皖北也是全國手足口的多發(fā)地,因此對(duì)該地區(qū)2011年度手足口病流行特征的研究及如何早期、快速、準(zhǔn)確地檢出病原,在

3、以后對(duì)手足口病的預(yù)防,檢測及治療過程中具有重要意義。如何在發(fā)病早期評(píng)價(jià)其發(fā)生重癥事件的危險(xiǎn)性并及時(shí)給予正確干預(yù),對(duì)改善疾病預(yù)后、提高患者的生存率至關(guān)重要。本研究對(duì)2011年1～12月兒童手足口病流行期間的手足口病患兒進(jìn)行病原學(xué)檢測,以了解亳州市腸道病毒的感染情況,并研究如何早期、快速、準(zhǔn)確地檢測出病原,為手足口病的綜合防治和腸道病毒的動(dòng)態(tài)監(jiān)測提供依據(jù)和手段。
　　方法：選擇2011年1～12月在亳州市CDC轄屬區(qū)上報(bào)的手足口病例1

4、93例,采集咽拭子188份,對(duì)亳州市人民醫(yī)院臨床診斷為手足口病的患兒同時(shí)采集糞便、皰疹液及腦脊液標(biāo)本64份,用熒光定量PCR(FQ-PCR)方法對(duì)上述252臨床標(biāo)本進(jìn)行EV、EV71和CA16病毒特異性核酸片段檢測;對(duì)193例臨床診斷病例采集的252份不同種類的標(biāo)本的陽性率分別進(jìn)行比較,并判斷不同標(biāo)本檢出率是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,以尋找方便易得、患者依從性好的實(shí)驗(yàn)室臨床診斷標(biāo)本;對(duì)188份中的124份咽拭子用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR

5、)進(jìn)行檢測,比較兩種方法陽性檢出率的差異,同時(shí)對(duì)兩種方法檢測相異的結(jié)果送至北京華肽先鋒生物有限公司做測序;收集HFMD患兒的臨床流行病學(xué)資料,利用SPSS13.0軟件錄入檢驗(yàn)結(jié)果后進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,兩樣本率的比較用四格表/配對(duì)卡方檢驗(yàn),多個(gè)樣本率的比較用行乘列表卡方檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.193例患兒共采集252份標(biāo)本,其中咽拭子188份、糞便53份、皰疹液7份、腦脊液4份,標(biāo)本采集的平均時(shí)間為患病后3.5d;咽拭子標(biāo)本

6、病毒檢出率為75.00％(106/188),糞便檢出率為81.13%(43/53),皰疹液標(biāo)本檢出率85.71%(6/7),腦脊液的檢出率25%(1/4),本研究表明皰疹液標(biāo)本的病毒檢出率較高。
　　2.252份臨床診斷的手足口標(biāo)本中,191份為腸道通用病毒陽性,其中106份EV71陽性,25份CA16陽性,60份EV71、CoxA16同時(shí)陽性,EV71的陽性檢出率顯著高于CA16和混合感染的陽性檢出率(χ2=63.369,P=0

7、.000<0.05),且CA16單獨(dú)感染較少見,往往伴隨EV71的流行。
　　3.本研究中對(duì)53份臨床診斷病例進(jìn)行聯(lián)合采樣,咽拭子、糞便、皰疹液和腦脊液不同種組合方式的陽性率也有所不同,聯(lián)合采樣的陽性率有所提高。
　　4.本研究中FQ-PCR和RT-PCR兩種方法對(duì)EV71和CA16陽性檢出率比較,差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為99.2、101.98,P均等于0.000<0.05)。
　　5.本研究中有141份標(biāo)

8、本EV71呈陽性或CA16呈陽性或他們同時(shí)陽性(總的陽性檢出率為75.00%),但病毒核酸的陽性檢出率在不同時(shí)間階段的差異,顯示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.EV71和CA16是2011年度本地區(qū)HFMD流行的主要致病病毒。
　　2.亳州地區(qū)2011年手足口感染以EV71為主,且CA16的感染往往伴隨EV71的流行。
　　3.本次手足口病流行,EV71陽性患兒和CA16陽性患兒的癥狀均較輕,臨床表現(xiàn)相似,