CETP-629C-A基因多態(tài)性與阿托伐他汀鈣對冠心病患者調(diào)脂療效的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　本文旨在研究中國天津地區(qū)人群CETP-629C/A基因多態(tài)性、血清CETP含量、脂蛋白代謝及與CHD發(fā)病風(fēng)險相互之間的關(guān)系；采用體外分子克隆重組研究方法，探討啟動子區(qū)基因變異對CETP轉(zhuǎn)錄活性的影響；觀察他汀類藥物對CETP-629C/A不同基因型的冠心病患者的血脂調(diào)節(jié)作用，為探討中國人冠心病發(fā)病的分子遺傳基礎(chǔ)提供理論依據(jù)，同時能為心血管疾病患者提供更科學(xué)及更具體的個性化治療。
　　方法：
　　1.CETP

2、-629C/A基因多態(tài)性與脂蛋白代謝和CHD的相關(guān)性：采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的成組病例對照研究方法，研究對象來自2010年10月～2011年10月天津市胸科醫(yī)院心內(nèi)科住院并接受冠狀動脈造影檢查的患者，天津地區(qū)漢族人群，根據(jù)冠脈造影結(jié)果分為冠心病組429例，正常對照組275例。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法，檢測UCETP-629C/A基因型，同時采用ELISA方法測定其血清CETP的含量，分析CETP-629C

3、/A基因多態(tài)性、血清CETP含量、脂蛋白代謝及與CHD發(fā)病風(fēng)險相互之間的關(guān)系。
　　2.CETP啟動子區(qū)-629C/A基因變異在真核細(xì)胞中對轉(zhuǎn)錄活性的影響：選取第一部分實驗中CETP-629CC和-629AA純合子基因，通過PCR方法擴(kuò)增CETP啟動子區(qū)域-745～+31bp基因片段。純化后，將該片段與作為中間環(huán)節(jié)pUCm-T載體相連接，構(gòu)建pUC-CETP/-629CC和pUC-CETP/-629AA重組質(zhì)粒，限制性核酸內(nèi)切酶和

4、DNA測序鑒定連接正確后，采用限制性核酸內(nèi)切酶SacⅠ，BglⅡ進(jìn)行特定位點的酶切，將酶切后片段與pGL2-Basic質(zhì)粒通過T4-DNA連接酶相連接，構(gòu)建pGL2-CETP/-629CC和pGL2-CETP/-629AA重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒DNA測序正確后，用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HepG2細(xì)胞，進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)。收集細(xì)胞測定細(xì)胞中熒光素酶報告基因的強(qiáng)度，計算不同重組質(zhì)粒熒光素酶相對活性來反映CETP不同基因型轉(zhuǎn)錄活性。

5、
　　3.CETP-629C/A基因多態(tài)性與阿托伐他汀鈣對CHD患者血脂調(diào)節(jié)作用的關(guān)系：所有CHD患者入院后給予阿托伐他汀鈣(美國輝瑞制藥有限公司提供)20mg，每晚1次口服。治療3個月后，復(fù)查血脂水平，觀察他汀類藥物對攜帶CETP-629C/A不同基因型冠心病患者的血脂調(diào)節(jié)作用，建立他汀類藥物的適用人群。
　　結(jié)果：
　　1.天津地區(qū)漢族人群CETP基因-629位點A等位基因頻率為0.408，明顯低于國內(nèi)其他地區(qū)及國

6、外人群(0.479～0.701，P<0.05)。
　　2.突變型純合子AA基因型血清CETP濃度低于野生型純合子CC基因型(P>0.05)，而HDL-C水平顯著增高(P<0.05)。
　　3.血清CETP濃度與HDL-C水平呈負(fù)向變化趨勢，其相關(guān)性未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.冠心病組及對照組CETP-629C/A各基因型和等位基因分布的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；攜帶CA/AA基因型和攜帶A等位

7、基因個體發(fā)生冠心病的危險性增加，OR(95％CI)值分別為4.627(3.163～6.769)、8.779(4.799～16.059)和3.173(2.453～4.104)，調(diào)整了年齡、性別、BMI、吸煙、高血壓、糖尿病和血脂代謝障礙等混雜因素后這種關(guān)聯(lián)仍然存在。結(jié)果顯示CETP-629C→A突變與CHD的發(fā)病風(fēng)險密切相關(guān)，變異基因型(CA和AA)是CHD發(fā)病風(fēng)險的獨立危險因素，CETP-629A等位基因可能是中國天津地區(qū)漢族人群的冠心

8、病遺傳易感基因。但是CETP-629C/A基因多態(tài)性與冠狀動脈血管病變程度不相關(guān)(x2=3.588，P>0.05)。
　　5.多因素非條件logistic回歸冠心病的主要危險因素包括：既往有糖尿病史、吸煙、血清FBG、LDL-C、LP(a)水平高、血清HDL-C水平低、攜帶CETP基因CA/AA基因型。
　　6.pGL2-CETP/-629AA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后表達(dá)的熒光素酶相對活性明顯低于pGL2-CETP/-629CC

9、表達(dá)活性(P<0.05)，在體外情況下A等位基因的轉(zhuǎn)錄活性顯著低于C等位基因。
　　7.阿托伐他汀鈣對CHD患者的血脂調(diào)節(jié)作用與CETP基因多態(tài)性具有相關(guān)性，CC基因型與CA、AA基因型比較，LDL-C水平下降最明顯為35.47％(均P<0.05)，LP(a)水平下降最明顯為34.86％(均P<0.05)，HDL-C水平升高最明顯為9.49％(均P>0.05)，-629CC基因型攜帶者有更好的他汀類調(diào)脂效果。
　　結(jié)論：

10、r>　　1.天津地區(qū)漢族人群CETP-629C/A基因型和等位基因頻率分布與國內(nèi)其他地區(qū)及國外人群有明顯差異。
　　2.體外報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果表明在體外情況下變異型A等位基因的轉(zhuǎn)錄活性顯著低于野生型C等位基因，CETP基因-629C/A位點是功能性位點，可以調(diào)節(jié)CETP啟動子的轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而影響血清CETP濃度。臨床部分結(jié)果提示變異型純合子AA基因型血清CETP濃度低于野生型純合子CC基因型，與體外試驗結(jié)果的趨勢一致。
　　3

11、.CETP-629C/A基因多態(tài)性對血清HDL-C水平有顯著影響，AA基因型血清HDL-C水平比CC基因型顯著增高。
　　4.血清CETP濃度與HDL-C水平僅呈負(fù)向變化趨勢。
　　5.天津地區(qū)漢族人群CETP-629C→A突變與CHD的發(fā)病風(fēng)險密切相關(guān)，變異基因型(CA和AA)是CHD發(fā)病風(fēng)險的獨立危險因素，-629A等位基因可能是中國天津地區(qū)漢族人群的冠心病遺傳易感基因。
　　6.CETP基因-629C→A突變導(dǎo)致