核桃根腐病拮抗解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵優(yōu)化及其菌劑的研制.pdf

1、核桃（Juglans regia）是胡桃科核桃屬多年生落葉果樹，核桃的果實、種殼、枝葉及木材都有多種用途，因其果仁營養(yǎng)豐富，口味較佳及其用途多樣，使核桃被評為世界四大堅果之一。核桃在全世界很多地方都有種植，在中國核桃是經(jīng)濟樹種中分布最廣泛的樹種之一，而且在最近的研究中發(fā)現(xiàn)中國是核桃起源地之一。隨著核桃病害的逐漸嚴(yán)重，人們對于核桃病害的研究也越來越重視。通過查閱大量文獻發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌對許多植物病害有較強拮抗性，因此本實驗利用一株在預(yù)實

2、驗中對核桃根腐病病原菌有較強抑制作用的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)作為生防菌，通過發(fā)酵工藝優(yōu)化提高其發(fā)酵液的抑菌率。最后，將發(fā)酵液制成一種有效的可濕性粉劑。主要內(nèi)容結(jié)果如下:
　　(1)解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的優(yōu)化。在單因素法和正交試驗相結(jié)合的研究中發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中最佳的碳源為1％的可溶性淀粉，最佳氮源為1％的蛋白胨，最佳無機鹽為0.01％的KH2PO4和0.05％的MgSO4;在小

3、型發(fā)酵罐中用單因素法通過不同接種量和不同時間段的抑菌率變化篩選出的最佳發(fā)酵條件為:1％的接種量和42 h的發(fā)酵時間，然后通過正交試驗篩選出的最佳發(fā)酵條件溫度為25℃，初始pH值為7.0，攪拌速度為200 r/min，通氣量為100 L/h，在這樣的條件下可以使生防菌獲得較高的抑菌活性。其中在正交試驗中的數(shù)據(jù)顯示營養(yǎng)元素中影響抑菌性大小的順序為:可溶性淀粉＞蛋白胨＞MgSO4＞KH2PO4;發(fā)酵條件中影響抑菌性大小的順序為:通氣量＞攪拌速

4、度＞pH＞溫度。
　　(2)可濕性粉劑的載體和助劑的篩選和最佳配比的確定。首先利用各種載體和助劑對生防菌活性的影響，采用單因素法進行篩選，得到的結(jié)果為:載體為高嶺土，分散劑為三聚磷酸鈉，潤濕劑為十二烷基苯磺酸鈉，保護劑為腐殖酸。然后再通過懸浮率和生防菌活性兩個因素，進行正交試驗后得到的數(shù)據(jù)通過比較顯示最佳的配比為:高嶺土35％、三聚磷酸鈉5％、十二烷基苯磺酸鈉10％、腐殖酸2.5％，其中對于生防菌活性的影響大小的順序為:高嶺土＞三