解淀粉芽孢桿菌jy-1產(chǎn)細(xì)菌素發(fā)酵條件研究——畢業(yè)論文

1、<p>　　湖 南 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué)</p><p>　　全日制普通本科生畢業(yè)論文</p><p>　　解淀粉芽孢桿菌JY-1產(chǎn)細(xì)菌素發(fā)酵條件研究</p><p>　　OPTIMIZATION OF FERMENTATION CONDITIONS FOR PRODUCTION OF BACTERIOCIN BY BACILLUS AMYLOLIQUEFACI

2、ENS JY-1</p><p><b>　　學(xué)生姓名：</b></p><p><b>　　學(xué)號：</b></p><p>　　年級專業(yè)及班級： 食質(zhì) </p><p>　　指導(dǎo)老師及職稱： </p><p>　　學(xué)院：食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院</p><p

3、><b>　　湖南·長沙</b></p><p><b>　　提交日期： 年 月</b></p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1 前言4</b></p><p><b>　　2材料與方

4、法7</b></p><p><b>　　2.1試驗材料7</b></p><p>　　2.1.1 菌種7</p><p><b>　　2.1.2器具7</b></p><p>　　2.1.3培養(yǎng)基7</p><p>　　2.1.4儀器與設(shè)備7<

5、/p><p><b>　　2.2試驗方法8</b></p><p>　　2.2.1 菌種的活化8</p><p>　　2.2.2 抑菌方法8</p><p>　　2.2.3 外源碳源對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響8</p><p>　　2.2.4外源氮源對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響8</p><

6、;p>　　2.2.5培養(yǎng)溫度對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響9</p><p>　　2.2.6 轉(zhuǎn)速對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響9</p><p>　　2.2.7發(fā)酵工藝的正交化設(shè)計9</p><p>　　2.2.8數(shù)據(jù)分析9</p><p>　　3 結(jié)果和分析10</p><p>　　3.1外源碳源對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響1

7、0</p><p>　　3.2外源氮源對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響10</p><p>　　3.3培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響10</p><p>　　3.4轉(zhuǎn)速對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響11</p><p>　　3.5正交實驗結(jié)果11</p><p>　　3.6方差分析確定最佳實驗結(jié)果12</p><

8、p><b>　　4 結(jié)論15</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)16</b></p><p><b>　　致謝19</b></p><p>　　解淀粉芽孢桿菌JY-1產(chǎn)細(xì)菌素發(fā)酵條件研究</p><p>　　摘要：本研究以單增李斯特細(xì)菌54002作為指示

9、菌。采用杯碟法作為抑菌試驗方法，對解淀粉芽孢桿菌JY-1所產(chǎn)細(xì)菌素的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。由正交試驗設(shè)計得出產(chǎn)細(xì)菌素最佳條件為：0.5%含量的牛肉膏，1%含量的可溶性淀粉，在33℃，轉(zhuǎn)速250r/min下培養(yǎng)22 h。在該發(fā)酵條件下，檢測出來的細(xì)菌素的抑菌圈大小為11.1mm。</p><p>　　關(guān)鍵詞:細(xì)菌素；發(fā)酵條件優(yōu)化；正交設(shè)計</p><p>　　Optimization of F

10、ermentation Conditions for Production of Bacteriocin by Bacillus amyloliquefaciens JY-1</p><p>　　Abstract:By using Listeria monocytogenes54002 as the indicator bacteria, the bacterial inhibition zone diamete

11、r was considered as an indicator, and the fermentation conditions ofbacteriocin produced by B. amyloliquefaciensJY-1 were optimized. The experiment was designed by orthogonal design method, and the best experimental grou

12、p was 4 groups: 0.5% beef extract, 1% soluble starch, 33 ℃, 250r/min. Under this condition, the inhibition zone size was 11.1mm.</p><p>　　Key words: bacteriocin;optimization of fermentation condition;orthogo

13、nal design.</p><p><b>　　1.前言</b></p><p>　　細(xì)菌素是一種細(xì)菌在代謝過程中通過核糖體的作用合成的一種具有抑制親緣性菌種活性作用的多肽或前體多肽類物質(zhì)，對相對近緣性菌種呈現(xiàn)較窄的抑菌譜[1]該物質(zhì)能抑制靶細(xì)胞中肽聚糖的生物合成，抑制與核糖體結(jié)合的蛋白質(zhì)合成，或直接降解靶細(xì)胞DNA，實現(xiàn)其抑菌作用[2]。</p>

14、<p>　　部分研究表明，分子基團(tuán)的相互作用使細(xì)菌素和細(xì)胞的相互作用更容易進(jìn)行，從而提高細(xì)菌素的抑菌效果[3]該機(jī)制成功地闡明了Nisin和美沙西汀的作用機(jī)理[4]。</p><p>　　現(xiàn)代細(xì)菌素是可以用于肉類工業(yè)、奶制品加工業(yè)、釀酒與糧食加工等領(lǐng)域等的抑制菌種的生物制品[5]?？捎糜诜乐稳忸惖仁称分杏泻旱纳L，也可用于其他各類食品加工工業(yè)的生物菌種防治[6]。</p><p&

15、gt;　　現(xiàn)代細(xì)菌素的運(yùn)用還不是非常廣泛硝酸鹽被廣泛應(yīng)用于肉制品中，以防止梭菌的存在，使食物容易變質(zhì)，但對人體健康非常有害，甚至危及生命。而細(xì)菌素則擁有高效，安全等特點(diǎn)，急需我們?nèi)ミ\(yùn)用[7]。最新的細(xì)菌素在食品中的應(yīng)用是乳鏈菌肽，在美國，已經(jīng)被法律列為可使用的食品添加劑[8]。而解淀粉芽孢桿菌是現(xiàn)代實驗和科研檢測用的較為成熟的一種實驗菌種，故在生產(chǎn)發(fā)酵細(xì)菌素的研究中，可通過各項因素（碳源、氮源、生長因子、溫度、水分、ph等）的各項改變產(chǎn)

16、生的細(xì)菌素產(chǎn)量的不同，運(yùn)用正交設(shè)計法來研究最為高產(chǎn)的生長條件，來起到提高細(xì)菌素產(chǎn)量的目的。</p><p>　　抗菌肽是昆蟲體內(nèi)產(chǎn)生的一種抗菌堿性多肽[9]。該肽的分子量k可以大致約為3000～8000，由30～70個氨基酸殘基組成。這些活性肽大多具有較強(qiáng)的堿性、熱穩(wěn)定性和廣譜抗菌性能。世界上第一個被發(fā)現(xiàn)的抗菌肽的是1980年由瑞典科學(xué)家G.BoMand等已注入大腸桿菌和大腸桿菌誘導(dǎo)產(chǎn)生抗菌肽PuPui蛹，稱為抗

17、菌肽。</p><p>　　細(xì)菌中有4種:Bacitracin、S（短桿菌肽S）、多粘菌素E（多粘菌素E）和乳酸桿菌（NISIN）。它是一種耐酸物質(zhì)，即使在低pH環(huán)境下，如胃，它可以抑制革蘭氏陽性細(xì)菌，如梭形芽孢桿菌和李斯特菌?？咕牡漠a(chǎn)率和活性受溫度、培養(yǎng)基組成等環(huán)境條件的影響很大。因此，發(fā)酵條件的研究是非常重要的[ 10 ]。</p><p>　　正交試驗設(shè)計（正交試驗設(shè)計）是一種研究

18、多因素、多層次的試驗設(shè)計方法。基于正交性，從綜合測試中選取一些有代表性的點(diǎn)。這些代表點(diǎn)具有“均勻分散和均勻比”的特點(diǎn)。日本著名統(tǒng)計學(xué)家Taguchi Xuanichi列出了通過正交實驗選擇的水平組合，稱為正交陣列。例如，需要三個因素和三個水平的實驗。根據(jù)綜合實驗的要求，應(yīng)進(jìn)行3^3＝27組合，各組合的重復(fù)尚未考慮。根據(jù)L9（34）正交表，需要9個實驗，并根據(jù)L18（35）正交表進(jìn)行18個實驗，這明顯地減少了工作量。因此，正交試驗設(shè)計在許

19、多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。</p><p>　　L是正交表中的代碼，n是測試次數(shù)，t是水平，C是列的數(shù)目，即可以安排的因素的數(shù)量。例如，L9（34）表明需要9個實驗，最多可以觀察到4個因素。每個因素是3水平。正交表中每個列的水平數(shù)也不相等。我們稱之為混合正交表，如L8（4×2）。在該表的5列中，1列為4列，4列為2級[11]。</p><p>　　芽孢桿菌（Bacillus spp

20、.）生長迅速、營養(yǎng)要求簡單、抗逆性強(qiáng)（芽孢擁有非常強(qiáng)的抗逆性，可耐高溫，高壓，高滲透壓等），可以生產(chǎn)多肽抗生素，并且可以產(chǎn)生具有細(xì)菌作用的酶。利用芽孢桿菌及其代謝產(chǎn)物是防治真菌病害最安全、有效、最有前途的天然生物制劑。</p><p>　　解淀粉芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌屬中枯草芽孢桿菌種中的解淀粉枯草芽孢桿菌亞種，也是我們現(xiàn)代實驗室中常用于研究的菌種，屬于格蘭氏陽性桿菌。它作為一個用于研究的菌種，具有易培養(yǎng)，生產(chǎn)量

21、大，實驗效果明顯的特點(diǎn)。</p><p>　　在實驗室初期，對真菌的種類進(jìn)行分離鑒定，篩選出對霉菌生長和孢子萌發(fā)有較強(qiáng)抑制作用的孢子菌株。與傳統(tǒng)的化學(xué)防腐劑相比，它們所分泌的抗菌物質(zhì)在抑制霉菌生長方面更有效。</p><p><b>　　2.材料與方法</b></p><p><b>　　2.1 材料</b></p

22、><p><b>　　2.1.1 菌種</b></p><p>　　解淀粉芽孢桿菌JY-1及指示菌單增李斯特菌54002，本實驗室保存。</p><p><b>　　2.1.2器具</b></p><p>　　黃漿水（購自湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)濱湖農(nóng)貿(mào)市場），培養(yǎng)皿，燒杯，接種針，酒精燈，試管，牛津杯，1.5mL

23、離心管，移液槍，塑料瓶（均由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院實驗室提供）</p><p><b>　　2.1.3 培養(yǎng)基</b></p><p>　　可溶性淀粉、牛肉膏、瓊脂（NA）培養(yǎng)基：購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司</p><p>　　2.1.4 儀器與設(shè)備</p><p>&l

24、t;b>　　表1 儀器與設(shè)備</b></p><p>　　Table 1 Instruments and equipment</p><p><b>　　2.2方法</b></p><p>　　2.2.1菌種的活化</p><p>　　將解淀粉芽孢桿菌JY-1（B.amyloliquefaciens

25、 JY-1）菌種接入無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h。</p><p>　　2.2.2 抑菌試驗方法</p><p>　　取活化后的單增李斯特菌菌液0.1mL與100mL融化后的并保持在50℃后左右的瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行混合，然后倒平板，待培養(yǎng)基凝固后放置無菌牛津杯，在牛津杯中加入0.2 mL JY-1的發(fā)酵上清液，然后在4℃冰箱中擴(kuò)散4 h以上。取出平板后于37℃培養(yǎng)12 h，之后觀

26、察抑菌圈大小，測量抑菌圈大小，并做記錄。</p><p>　　2.2.3外源碳源對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　以黃漿水代替培養(yǎng)基中的水，分別加入終濃度為2%的碳源（碳源種類：葡萄糖、可溶性淀粉、果糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖），以不加碳源的黃漿水培養(yǎng)基作為對照。以3%接種量接種活化后的芽孢桿菌JY-1，在150 rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)22 h。將培養(yǎng)后的菌液6000 r/min離心3

27、min，取上清液進(jìn)行抑菌試驗，測定抑菌圈直徑。</p><p>　　2.2.4外源氮源對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　以黃漿水代替培養(yǎng)基中的水，分別加入終濃度為0.5%的氮源（氮源種類：牛肉膏、蛋白胨、氯化銨、酵母膏），以不加氮源的黃降水培養(yǎng)基作為對照。以3%接種量接種活化后的芽孢桿菌JY-1，在150 r/min轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)22 h。將培養(yǎng)后的菌液6000 r/min離心3

28、min，取上清進(jìn)行抑菌試驗，測定抑菌圈直徑大小。</p><p>　　2.2.5 培養(yǎng)溫度對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　將滅菌后的黃漿水按照以3%接種量接種活化后的芽孢桿菌JY-1，然后在不同的溫度（28℃、33℃、38℃）下150 rpm培養(yǎng)22h（恒溫培養(yǎng)振蕩器中），取培養(yǎng)液進(jìn)行離心（6000r/min下3min）。取菌液的上清液進(jìn)行抑菌試驗，測定抑菌圈大小。</p>

29、;<p>　　2.2.6 轉(zhuǎn)速對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　將滅菌后的黃漿水按照3%接種量接種活化后的芽孢桿菌JY-1，然后在37℃，不同的轉(zhuǎn)速r/min（170、210、250）下培養(yǎng)22 h，取將培養(yǎng)液進(jìn)行離心（6000r/min下3min）。取菌液的上清液進(jìn)行抑菌試驗，測定抑菌圈大小。</p><p>　　2.2.7 正交試驗優(yōu)化</p><

30、p>　　發(fā)酵工藝的正交優(yōu)化設(shè)計采用4個關(guān)鍵因子：牛肉膏（x1，3水平）、可溶性淀粉（x2，3水平）、溫度（x3，3水平）、轉(zhuǎn)速（x4，3水平）進(jìn)行混合正交設(shè)計，見表2。</p><p>　　表2 設(shè)計因素及水平表</p><p>　　Table 2 Factors and levels in Box-Behnken central composite design</p>

31、<p><b>　　2.2.8數(shù)據(jù)分析</b></p><p>　　采用SPSS 17進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并將處理好的結(jié)果進(jìn)行整理并分析。</p><p><b>　　3.結(jié)果和分析</b></p><p>　　3.1 外源碳源對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　在黃漿水中加入2%不同種類

32、的碳源，培養(yǎng)JY-1后，其發(fā)酵液的抑菌圈大小見圖1。</p><p>　　圖1 外源添加不同碳源抑菌圈直徑大小</p><p>　　Fig.1 The diameter of different carbon source inhibition zone was added.</p><p>　　從圖1中可以看出，添加一定濃度的碳源，均能促進(jìn)細(xì)菌素的產(chǎn)生。其中添加可

33、溶性淀粉培養(yǎng)時，JY-1的細(xì)菌素產(chǎn)量最高，故選用可溶性淀粉作為最佳碳源。</p><p>　　3.2 外源氮源對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　在黃漿水中加入2%不同種類的氮源，培養(yǎng)JY-1后，其發(fā)酵液的抑菌圈大小見圖2。</p><p>　　圖2 外源添加不同碳源抑菌圈直徑大小</p><p>　　Fig.2 The diameter

34、 of different carbon source inhibition zone was added.</p><p>　　從圖2中可以看出，添加不同種類的氮源，均能促進(jìn)細(xì)菌素的產(chǎn)生。其中添加牛肉膏進(jìn)行解淀粉芽孢桿菌的培養(yǎng)，細(xì)菌素的產(chǎn)量最高，故選用牛肉膏作為最佳氮源。</p><p>　　3.3培養(yǎng)溫度對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　將JY-1接種于黃漿

35、水中，于不同溫度下培養(yǎng)，抑菌圈大小見圖3。</p><p>　　圖3 不同溫度下抑菌圈直徑大小</p><p>　　Fig. 3 The diameter of the antibacterial ring at different temperatures.</p><p>　　從圖3中可以看出，溫度對細(xì)菌素產(chǎn)量有較顯著的影響，在33℃下細(xì)菌素產(chǎn)量最高。<

36、/p><p>　　3.4培養(yǎng)轉(zhuǎn)速對產(chǎn)細(xì)菌素的影響</p><p>　　將JY-1接種于黃漿水中，在不同轉(zhuǎn)速下進(jìn)行培養(yǎng)，其培養(yǎng)液的抑菌圈直徑大小見圖4。</p><p>　　圖4 不同轉(zhuǎn)速抑菌圈直徑大小</p><p>　　Fig. 4 the diameter of the antibacterial ring at different spe

37、ed.</p><p>　　從圖4中可以看出，溫度對細(xì)菌素產(chǎn)量有較顯著的影響，在210r/min下產(chǎn)量最高。</p><p>　　3.5 正交試驗結(jié)果</p><p>　　本試驗以提高細(xì)菌素產(chǎn)量為目標(biāo)，以確定最適宜的反應(yīng)條件為目的。影響本反應(yīng)產(chǎn)量的因素有氮源含量、碳源含量、轉(zhuǎn)速和溫度等。</p><p>　　將本試驗范圍分別定為：牛肉膏（x1

38、，3水平）、可溶性淀粉（x2，3水平）、溫度（x3，3水平）、轉(zhuǎn)速（x4，3水平）進(jìn)行正交設(shè)計。各因子的取值范圍分別為：0.1%≤x1≤0.9%、1%≤x2≤3%、28℃≤x3≤38℃、170 r/min≤x4≤250 r/min再從每一試驗范圍選取3個水平，即可設(shè)計成4因子3水平實驗方案，見表1。取反應(yīng)進(jìn)行到22h時的樣品分析，其實驗結(jié)果見表2。</p><p>　　表3 L9 ( 34 )正交實驗結(jié)果表&l

39、t;/p><p>　　Tab. 3 The Orthogonal Test Results with L9 ( 34 )</p><p>　　由k值可知最佳方案為A2B1C2D3。3.6方差分析確定最佳反應(yīng)條件</p><p>　　而后對實驗結(jié)果進(jìn)行方差分析。正交表中每一列方差值Sj已在表2中列出,根據(jù)Sj的大小，各因子對細(xì)菌素產(chǎn)量影響因素排序是牛肉膏含量影響最大，可

40、溶性淀粉含量影響最低，轉(zhuǎn)速和培養(yǎng)溫度這2個因子對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響不差上下。根據(jù)F檢驗判斷各因子影響的顯著性，計算結(jié)果見表3。</p><p>　　表4　抑菌圈大小方差分析結(jié)果</p><p>　　Tab. 4　Variance Analysis of Inhibition zone size</p><p>　　由表3可知FA、FB、FC、FD都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于F( 2，1

41、8)，故A、B、C、D等因子均為高度顯著的。這主要是因為解淀粉芽孢桿菌的生長繁殖及產(chǎn)細(xì)菌素需要合適濃度及調(diào)配均勻的氮源，碳源。一定的溫度保證了反應(yīng)體系的能量和微生物自身催化劑的活性并可提供反應(yīng)的場所；而轉(zhuǎn)速的快慢表示氣-液二相接觸程度,強(qiáng)化傳質(zhì)可以加快反應(yīng)的宏觀速度。</p><p><b>　　4.結(jié)論</b></p><p>　　通過該實驗我們運(yùn)用了正交設(shè)計優(yōu)化的

42、辦法優(yōu)化出了最好的細(xì)菌素發(fā)酵優(yōu)化條件，即0.5%的牛肉膏含量，1%的可溶性淀粉含量，33℃的發(fā)酵溫度以及250r/min的轉(zhuǎn)速。在這個發(fā)酵條件下，由細(xì)菌產(chǎn)的細(xì)菌素含量最大，抑菌圈大小達(dá)到11.1mm。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]徐顧榕等. 響應(yīng)面法優(yōu)化蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)類細(xì)菌素培養(yǎng)基[J]食品工業(yè)科技,2016, 19（3）:

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53、SD_2產(chǎn)抗菌肽發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化[J]. 食品科學(xué), 2010, 2(2):189-192</p><p>　　[19] 葉云峰, 黎起秦, 袁高慶, 等. 枯草芽孢桿菌B47菌株高產(chǎn)抗菌物質(zhì)的培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 微生物學(xué)通報, 2011, 38(9):1339-1346.</p><p>　　[20]丘加德. 剁辣椒純菌種發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)[J]. 辣椒雜志, 2006, 4(2):

54、 38-41.</p><p>　　[21]謝英,覃倩倩,張京聲,等.植物乳桿菌LB-B1產(chǎn)細(xì)菌素發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].中國釀造,2010,10:23-25</p><p>　　[22]Garver K I, Muriana P M. Detection, identification andcharacterization of bacteriocin-producing lactic

55、acid bacteriafrom retail food products[J]. International Journal of FoodMicrobiology,1993,19(4):241-258</p><p>　　[23]　Frederic L, De-Vuyst L. Growth of the bacterioicnproducingLactobacillus sakei strain CTC4

56、94 in MRS borth is strongly reduced due to nutrient exhaustion: a nutrientdepletion model for the growth of lactic acid bacteria[J].Applied Environmental Microbiology,2001,67(10):4407-4413</p><p>　　[24] 王軍,

57、龐廣昌. 抗菌肽抗菌機(jī)理的研究現(xiàn)狀及趨勢[J]. 食品科學(xué),2005, 26(8): 526-529.</p><p>　　[25]　暢曉淵.抗豬鏈球菌產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的篩選及發(fā)酵工藝研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué),2010</p><p>　　[26]　謝英,覃倩倩,張京聲,等.植物乳桿菌LB-B1產(chǎn)細(xì)菌素發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].中國釀造,2010,10:23-25</p>&

58、lt;p>　?。?7］陳雪, 侯紅漫, 陳莉, 等.產(chǎn)細(xì)菌素芽孢桿菌的篩選及發(fā)酵條件的研究[J].中國釀造, 2008( 9) : 26-30.</p><p>　　［28］田曉樂, 孟慶繁, 周杰.微生物防腐劑－細(xì)菌素的研究與應(yīng)用[J].食品工業(yè)科技，2004( 1) : 120－123.</p><p>　　［29］代志凱, 張翠, 阮征.實驗設(shè)計和優(yōu)化及其在發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化中的應(yīng)

59、用[J].微生物學(xué)通報，2010，37( 6) : 894－903.</p><p>　?。?0］伊守亮, 肖林, 顧正華, 等.管碟法測定Nisin效價[J].無錫輕工大學(xué)學(xué)報, 2004, 23(4) : 41-45.</p><p>　　[31]　秦振平,趙巧梅,尚龍安,等. 采用N P催化劑的芥酸氫化制備山崳酸工藝研究[ J]. 延安大學(xué)學(xué)報, 1998, 17( 1): 49-5

60、3.</p><p>　　[32]　秦振平. 芥酸加氫制備山崳酸的工藝及動力學(xué)研究[D]. 西安: 西北大學(xué)化學(xué)工程學(xué)系, 1997.</p><p>　　[33] Slavokhotova A, RogozhinE A, Musolyamov A K, et al. Novel antifungal a-hairpinin peptide from Stellaria media see

61、ds: structure, biosynthesis, gene structure and evolution[J]. PlantMolecular Biology, 2014, 84: 189-202.</p><p>　　[34] 孔建, 王文夕, 趙白鴿, 等. 枯草芽孢桿菌 B-903 菌株的研究: Ⅲ.影響抗菌物質(zhì)產(chǎn)生和積累的主要因素[J].中國生物防治, 2000, 16(2):65-68.<

62、;/p><p><b>　　致 謝</b></p><p>　　本論文是我在老師的悉心指導(dǎo)和熱情關(guān)懷下完成的。老師淵博的專業(yè)知識、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，誨人不倦的高尚師德，嚴(yán)于律己、寬以待人的崇高風(fēng)范，樸實無華、平易近人的人格魅力對本人影響深遠(yuǎn)。不僅使本人樹立了遠(yuǎn)大的學(xué)習(xí)目標(biāo)、掌握了基本的研究方法，還使本人明白了許多為人處事的道理。從論文選題、試驗設(shè)計

63、、開題報告、實驗進(jìn)行、后期數(shù)據(jù)采集到論文完結(jié)，導(dǎo)師都給予了我非常多指導(dǎo)性的建議。老師嚴(yán)肅的科學(xué)態(tài)度，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)精神和精益求精的工作作風(fēng)，這些都是讓我受益匪淺的地方。導(dǎo)師的悉心指導(dǎo)和細(xì)心修改是此文能順利完成的重要保證。</p><p>　　時光如流水般匆匆逝去，轉(zhuǎn)眼間我在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)也度過了四年美好的時光，轉(zhuǎn)眼便是大學(xué)畢業(yè)時節(jié)，離校日期已日趨漸進(jìn)，畢業(yè)論文的完成也隨之進(jìn)入了尾聲。從開始進(jìn)入課題到論文的順利完成，一直

64、都離不開老師、同學(xué)、朋友給我熱情的幫助，在這里請接受我誠摯的謝意！在此我向湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)專業(yè)的所有老師表示衷心的感謝，在大學(xué)四年的學(xué)習(xí)時光中，我系統(tǒng)學(xué)習(xí)了食品質(zhì)量與安全專業(yè)的很多知識，在學(xué)院各位老師們的諄諄教誨下，我從一個剛進(jìn)大學(xué)的沒有目標(biāo)，沒有理想的懵懂小青年，成為了現(xiàn)在立志在進(jìn)入社會前將繼續(xù)提升自己的專業(yè)知識的食品人，真的要感謝所有老師的栽培。在今后離開農(nóng)大繼續(xù)求學(xué)的漫漫長路上，我永遠(yuǎn)不會忘記在湖南農(nóng)大的四年學(xué)習(xí)時光，不會

65、忘記農(nóng)大校訓(xùn)中“樸誠，奮勉，求實，創(chuàng)新”給我的教誨，無論未來的路是否好走，求學(xué)的路是否布滿荊棘，我都會帶著這樣的教誨繼續(xù)走下去。除此之外，在學(xué)習(xí)生活中與我共同前行、共同進(jìn)步的同學(xué)們也必須感謝。首先，感謝幫助我進(jìn)行課題研究的雷文平學(xué)長、王晶晶學(xué)姐和程海生同學(xué)，你們的堅持不懈、刻苦鉆研，悉心幫助是此文能順利完成的又一保證。還要感謝我的室友與同學(xué)在大學(xué)生活中對我的照顧與幫助。感謝有你們</p><p>　　最后，我要感

66、謝我的家人給我的鼓勵與支持。當(dāng)四年之前，我獨(dú)自一人踏上前往長沙的火車時，第一次獨(dú)自離開遙遠(yuǎn)的家鄉(xiāng)來到湖南求學(xué)，雖然艱辛又困難，但是父母家人一直在后面支持鼓勵著我。走過四年大學(xué)求學(xué)路，再回首過往才發(fā)覺，家一直是我勇敢向前，突破一切困難和辛苦的最堅實的后盾。</p><p>　　試驗過程中雖然遇到了不少波折坎坷，但是我們依然不拋棄、不放棄，一直堅持到了最后。再次感謝在本科生涯中所有給予過我關(guān)心與幫助的人，感謝生命中有