ERK蛋白磷酸化在ⅢB期結(jié)腸癌的臨床意義.pdf

1、1.研究背景及目的： 結(jié)腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，2005年，估計(jì)有104，950新發(fā)結(jié)直腸癌，同年，約56，290病人死于結(jié)直腸癌。研究發(fā)現(xiàn)MAPK(有絲分裂原激活蛋白激酶、mitogen-activated protein kinase)信號(hào)通路在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。MAPK采用了進(jìn)化保守的三級(jí)激酶級(jí)聯(lián)形式傳導(dǎo)信號(hào)：細(xì)胞受刺激后激活MAPK激酶的激酶(MKKK)，進(jìn)而激活MAPK激酶(MKK)，MKK激活后

2、通過雙位點(diǎn)磷酸化MAPK。磷酸化的MAPK(p-MAPK)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相繼激話即刻早期原癌基因(immediately-early oncogenes)導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。 MAPK主要有4條通路，即細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)通路，c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase)/應(yīng)激激活蛋白激酶(stress-a

3、ctivated protein kinase，SAPK)通路，大絲裂原活化蛋白激酶(Big MAPkinase，BMK)/ERK5通路和p38MAPK通路。 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)通路是該系統(tǒng)主要和經(jīng)典的通路。經(jīng)典的ERK在雙磷酸化功能域上有一Thr-Glu-Tyr(TEY)基序，由促有絲分裂的刺激因子如生長因子等主要通過受體酪氨酸激酶Ras通路

4、起作用激活，ERK的活化被認(rèn)為與細(xì)胞的分化、癌變和惡性進(jìn)展程度等密切相關(guān)。近年來，建立此分子生物學(xué)基礎(chǔ)上的靶向治療，己經(jīng)取得了實(shí)質(zhì)性的療效，以FDA批準(zhǔn)單克隆抗體cetuximab治療晚期大腸癌為標(biāo)志，預(yù)示著大腸癌進(jìn)入靶向治療新紀(jì)元。作為EGFR的單克隆抗體cetuximab仍有許多亟待解決的問題，如哪些結(jié)直腸癌患者(colorectal cancer，CRC)更適宜C225治療，確定敏感的分了預(yù)測(cè)指標(biāo)，最佳使用劑量、最佳聯(lián)合方案、能否

5、多靶點(diǎn)聯(lián)合治療等均需前瞻性、多中心隨機(jī)對(duì)比研究，尤其是哪些結(jié)腸癌患者適合分子靶向治療是亟待解決的問題。其它的EGFR抑制劑有g(shù)efitinib、erlotinib等，raf抑制劑有sorafenib，MEK的抑制劑也正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。研究表明EGFR依賴的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要有RAS/MAPK，PI3K/Akt通路等。這些通路的激活可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡和分化，促進(jìn)腫瘤侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 本研究以磷酸化ERK為RAS/ra

6、f/MAPK通路活化的標(biāo)志，觀察RAS/raf/MAPK通路在ⅢB期結(jié)腸癌的活化狀態(tài)及臨床意義。這條信號(hào)通路在結(jié)腸癌中的深化研究，將有助于對(duì)結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程的深刻理解以及對(duì)結(jié)腸癌的有效治療提供依據(jù)。同時(shí)從臨床應(yīng)用角度探索p-ERK成為結(jié)腸癌預(yù)后分子標(biāo)志物的價(jià)值。 2.材料與方法： 采用免疫組化方法檢測(cè)ERK在56例ⅢB期結(jié)腸癌組織中的磷酸化水平，深入研究ERK磷酸化水平與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，從臨床應(yīng)用角

7、度探索p-ERK成為預(yù)測(cè)結(jié)腸癌預(yù)后的分子標(biāo)志物的價(jià)值。為大腸癌的病理診斷、預(yù)后判斷以及治療提供客觀的參考指標(biāo)。 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 用免疫組化方法檢測(cè)ERK 1/2在56例結(jié)腸癌組織及其癌旁正常粘膜的磷酸化情況，發(fā)現(xiàn)ERK 1/2磷酸化出現(xiàn)于細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核。在56例癌旁正常粘膜中，僅1例出現(xiàn)ERK磷酸化。與癌旁正常粘膜相比，結(jié)腸癌組織的高磷酸化狀態(tài)占26/56(46.4％)；無變化占29/56(51.8％)；低磷酸化狀態(tài)

8、為1/56(1.7％)。這提示我們正常結(jié)腸粘膜幾乎無ERK磷酸化，而46.4％的癌組織處于ERK高磷酸化狀態(tài)，且統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(*P＜0.001)。用Log-rank法分析發(fā)現(xiàn)ERK 1/2蛋白磷酸化狀態(tài)與患者年齡、性別、部位及病理分級(jí)無關(guān)。用Kaplan-Meier法分析觀察到癌組織ERK磷酸化狀態(tài)與患者的5年生存率呈正相關(guān)關(guān)系，處于ERK高磷酸化狀態(tài)患者的生存時(shí)間長于無變化者(Log Rank P=0.011)?；颊吣挲g、性別、部位

9、及病理分級(jí)與生存無相關(guān)性。ERK磷酸化狀態(tài)是影響結(jié)腸癌患者5年生存率的預(yù)后因子。 4.結(jié)論： 4.1 在ⅢB期結(jié)腸癌組織中，正常結(jié)腸粘膜幾乎無ERK磷酸化，46.4％的癌組織處于ERK磷酸化狀態(tài)，51.8％的癌組織ERK磷酸化水平無變化。處于ERK磷酸化狀態(tài)患者的生存時(shí)間長于無變化者，提示ERK高磷酸化是ⅢB期結(jié)腸癌患者預(yù)后好的一個(gè)指標(biāo)。 4.2 ⅢB期結(jié)腸癌組織ERK高磷酸化者預(yù)后好，提示在ⅢB期結(jié)腸癌組