固定化酶柱與固定化菌體柱耦聯(lián)——高效拆分乙酰-DL-蛋氨酸.pdf

1、本文首次將固定化菌體與固定化酶實(shí)現(xiàn)了耦聯(lián),用于拆分乙酰-DL-蛋氨酸.先用固定化菌體在間歇振蕩反應(yīng)器內(nèi)對乙酰-DL-蛋氨酸進(jìn)行初拆分,再用固定化酶在填充床反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行高效拆分.包括以下內(nèi)容:氨基?；腹潭ɑd體的篩選.考察了十四種不同型號、性能的弱堿性大孔樹脂固定化酶活,研究發(fā)現(xiàn),DEAE-D/H-Ⅲ固定化氨基?；傅男Ч詈?固定化酶活1356.41U/g.研究了不同給酶量下DEAE-D/H-Ⅲ固定化酶活力收率.結(jié)果表明:酶液濃度11

2、5U/g時(shí),酶活力收率最高,為59.49﹪.具體分析了此固定化酶性質(zhì).結(jié)果表明,最佳pH、酶活最高時(shí)的反應(yīng)溫度和CO<'2+>濃度分別為6.5、65℃和5×10<'-4>mol/L.同時(shí)考察了固定化酶的穩(wěn)定性、再生性.在37℃下,固定化酶連續(xù)拆分乙酰-DL-蛋氨酸30天,酶活力降為最初的72.6﹪.失活的固定化酶經(jīng)洗脫、再生后,酶活達(dá)1380.64U/g,達(dá)到新樹脂固定化效果,證明載體再生性較好.米曲霉菌體(Aspergillus or

3、yzae3042)的液體培養(yǎng)和固定化研究.選用豆汁培養(yǎng)基,參照文獻(xiàn)規(guī)定的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng),經(jīng)冷凍干燥機(jī)干燥后菌體酶活2039U/g.采用甲醛和明膠固定化后的菌體酶活1708.68U/g,固定化效率為83.76﹪.研究固定化菌體拆分乙酰-DL-蛋氨酸的性質(zhì).結(jié)果表明最佳pH、酶活最高時(shí)的反應(yīng)溫度和CO<'2+>濃度分別為8.0、65℃和5×10<'-4>4mol/L. 固定化酶和固定化菌體動(dòng)力學(xué)研究.考察了底物濃度、產(chǎn)物濃度對拆

4、分反應(yīng)的影響.研究表明:固定化酶底物抑制濃度0.4 mol/L,低底物濃度下拆分反應(yīng)符合米氏方程,米氏常數(shù)Km為6.19mmol/L,不存在產(chǎn)物抑制；固定化菌體底物抑制濃度0.2 mol/L,產(chǎn)物抑制濃度0.01 mol/L,低濃度下拆分反應(yīng)符合米氏方程,米氏常數(shù)Km為7.76mmol/L.間歇振蕩反應(yīng)器和填充床反應(yīng)器模型建立.得出間歇振蕩反應(yīng)器在指定拆分率下的反應(yīng)時(shí)間；對填充床模型進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果表明,當(dāng)?shù)孜餄舛?.2 mol/L時(shí),