系統(tǒng)性紅斑狼瘡和炎癥性關(guān)節(jié)病外周血Th9細(xì)胞的檢測(cè)及意義.pdf

1、目的:
　　 探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)及炎癥性關(guān)節(jié)病包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis,RA)、強(qiáng)直性脊柱炎(AnkylosingSpondylitis,AS)患者外周血CD4+T細(xì)胞IL-9、IL-17、IFN-γ表達(dá)水平和IL-9、IL-17、RORγt、IFN-γmRNA水平,為進(jìn)一步闡明SLE等免疫相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制、探索該類疾病新的臨床治療

2、靶點(diǎn)提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 分離SLE和炎癥性關(guān)節(jié)病(RA、AS)患者和健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),通過(guò)免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞,PMA、Ion刺激,予固定、破膜劑處理,行細(xì)胞內(nèi)染色,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)IL-9、IFN-γ、IL-17水平;通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)IL-9、IL-17、RORγt、IFN-γmRNA水平。應(yīng)用Pearso

3、n相關(guān)性檢驗(yàn)分析胞內(nèi)IL-9水平與IFN-γ、IL-17、血清ANA滴度、C3、CRP水平、ESR值之間的關(guān)系。SLE和RA分組:①健康人對(duì)照組;②病情穩(wěn)定組;③病情活動(dòng)組;AS分組:①健康人對(duì)照組;②AS患者組。
　　 結(jié)果:
　　 (1)FCM檢測(cè)CD4+T細(xì)胞,結(jié)果顯示免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞純度達(dá)90%以上。
　　 (2)SLE病情活動(dòng)組胞內(nèi)IL-9水平顯著高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而病情穩(wěn)定組又

4、高于健康對(duì)照組(P＜0.05);胞內(nèi)IFN-γ水平SLE病情活動(dòng)組低于健康人對(duì)照組(P＜0.05)。A-CD3/A-CD28、PHA聯(lián)合刺激后,SLE患者CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)IL-9水平較A-CD3/A-CD28、PHA獨(dú)立刺激組和培養(yǎng)液組顯著升高(P＜0.01),而A-CD3/A-CD28、PHA獨(dú)立刺激組和培養(yǎng)液組之間無(wú)明顯差別。SLE病情活動(dòng)組患者IL-9mRNA水平顯著高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而病情穩(wěn)定組又高于健康對(duì)照組(

5、P＜0.05);SLE病情活動(dòng)組IFN-γmRNA低于健康人對(duì)照組(P＜0.05)。用A-CD3/A-CD28、PHA聯(lián)合刺激后,SLE患者CD4+T細(xì)胞IL-9mRNA表達(dá)水平較獨(dú)立刺激組和培養(yǎng)液組顯著升高(P＜0.01)。SLE患者CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)IL-9水平與胞內(nèi)IFN-γ水平及患者血清ANA滴度和C3水平無(wú)明顯相關(guān)。
　　 (3)RA患者病情活動(dòng)組胞內(nèi)IL-9的水平高于健康對(duì)照組(P＜0.05);RA病情活動(dòng)組胞內(nèi)IL

6、-17水平高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而病情穩(wěn)定組胞內(nèi)IL-17水平又高于健康人對(duì)照組(P＜0.05)。RA病情活動(dòng)組IL-9mRNA的表達(dá)高于健康對(duì)照組(P＜0.01)和病情穩(wěn)定組(P＜0.05),而病情穩(wěn)定組和健康對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05);RA病情活動(dòng)組IL-17表達(dá)高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而RA病情穩(wěn)定組IL-17表達(dá)又顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.05),RA病情活動(dòng)組RORγtmRNA表達(dá)高于病情穩(wěn)定組(P＜

7、0.01),而RA病情穩(wěn)定組RORγtmRNA表達(dá)又顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RA患者胞內(nèi)IL-9水平與IL-17水平、ESR、CRP水平無(wú)明顯相關(guān)性。(4)AS患者外周血胞內(nèi)IL-9和IL-9mRNA水平和健康對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05);胞內(nèi)IL-17水平和IL-17mRNA表達(dá)與健康對(duì)照組相比顯著增高(P＜0.01);胞內(nèi)IFN-γ水平和IFN-γmPNA表達(dá)較健康對(duì)照組顯著增高(P＜0.01)。<

8、br>　　 結(jié)論:
　　 (1)SLE患者外周血CD4+T細(xì)胞中Th9細(xì)胞百分比增高,Th1細(xì)胞百分比下降。Th9細(xì)胞增多、Th1細(xì)胞減少可能參與了SLE發(fā)病過(guò)程;A-CD3/A-CD28聯(lián)合PHA刺激后,T細(xì)胞活化,CD4+T細(xì)胞向Th9轉(zhuǎn)化顯著增多。
　　 (2)RA患者外周血CD4+T細(xì)胞中Th9、Th17細(xì)胞的百分比增高,Th9、Th17可能與RA的發(fā)病有關(guān)。
　　 (3)AS患者外周血CD4+T細(xì)胞中