阻斷胃泌素-CCKB受體環(huán)對胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響.pdf

1、 《中國圖書資料分類法》 單位代碼：10660 分類號：R73 學(xué) 號：10660S100110 貴陽醫(yī)學(xué)院 2013 屆碩士學(xué)位論文 阻斷胃泌素/CCKB 受體環(huán)對胃癌細(xì)胞 遷移、侵襲的影響 （保密時間：2013 年 6 月-2016 年 6 月） 研 究 生： 曾 怡 導(dǎo) 師： 周建獎 教授 年

2、級： 2010 級 專 業(yè)： 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 2013 年 5 月 15 日 貴陽醫(yī)學(xué)院 2013 屆碩士研究生論文 - 3 - 阻斷 阻斷胃泌素 胃泌素/CCKB 受體環(huán)對胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響 受體環(huán)對胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響 生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生：曾怡 導(dǎo)師：周建獎 教授 摘 要 [目的] 通過人膽囊收縮素 B(CCKB)受體阻斷劑丙谷胺(proglumide，PGL)阻斷高表達(dá)胃泌素(Gast

3、rin)胃癌細(xì)胞上 CCKB 受體， 同時用 RNA 干擾技術(shù)建立沉默胃泌素基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株，構(gòu)建阻斷胃泌素/CCKB 受體環(huán)的細(xì)胞模型，研究阻斷此環(huán)對胃癌細(xì)胞體外遷移、侵襲的影響及其分子機制。 [方法] 設(shè)計靶向胃泌素的 siRNA，構(gòu)建靶向胃泌素基因 siRNA 的真核表達(dá)載體Psilencer3.1/Gas－siRNA；轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞 AGS，用 G418 篩選陽性細(xì)胞克隆，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 AGS /Gas－siRNA；用丙

4、谷胺處理穩(wěn)定高表達(dá)胃泌素的胃癌細(xì)胞AGS/Gastrin、SGC-7901/Gastrin，通過 MTT 法、軟瓊脂克隆形成實驗檢測細(xì)胞增殖；細(xì)胞劃線實驗、Transwell 小室實驗檢測細(xì)胞遷移、侵襲； Real-time PCR、Western blot 檢測細(xì)胞中胃泌素 MMP-2、VEGF 基因和蛋白表達(dá)；ELISA 檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中 MMP-2、VEGF 濃度。 [結(jié)果] 成功構(gòu)建靶向胃泌素基因 siRNA 的真核表達(dá)載體 P

5、silencer3.1/Gas－siRNA，建立穩(wěn)定沉默胃泌素基因的胃癌細(xì)胞株 AGS /Gas－siRNA。用丙谷胺處理高表達(dá)胃泌素胃癌細(xì)胞和 siRNA 干擾沉默胃泌素基因后，細(xì)胞相對遷移距離、遷移細(xì)胞數(shù)及穿越基質(zhì)膠的侵襲細(xì)胞數(shù)均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 細(xì) 胞 增 殖 實 驗 中 ， 高 表 達(dá) 胃 泌 素 胃 癌 細(xì) 胞 的 相 對 增 殖 率 分 別 為205.22%(SGC-7901)和207.

6、43%(AGS)， 細(xì)胞克隆形成相當(dāng)率為 249.78%(SGC-7901)和 224.79%(AGS)，均高于空載體穩(wěn)轉(zhuǎn)的細(xì)胞(100%)，經(jīng)丙谷胺處理后，相對增殖率下降 107.46%(SGC-7901)和 110.53%(AGS)， 克隆形成相當(dāng)率下降 170.04% (SGC 7901)和 137.19%(AGS)； 沉默胃泌素基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞與空載體穩(wěn)轉(zhuǎn)的細(xì)胞比，相對增殖率下降 58.60%， 克隆形成率下降 47.11%，