Th17-Treg細(xì)胞失衡在兒童原發(fā)性腎病綜合征發(fā)病中的分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：IL-17在阿霉素腎病大鼠腎小球硬化中的作用研究
　　 目的：觀察IL-17在阿霉素腎病大鼠腎組織中的表達(dá)，并探討其在阿霉素腎病腎小球硬化中的作用。
　　 方法：雄性SD大鼠分為正常對照組，阿霉素腎病組（模型組），于第2、4、8、12周分別處死8只大鼠。光鏡觀察腎小球的病理學(xué)情況并分析腎小球硬化指數(shù)；采用半定量RT-PCR法檢測腎組織IL-17mRNA的表達(dá)；ELISA檢測腎組織勻漿上清中IL-17、IL-1β

2、蛋白水平；免疫組化觀察IL-17在腎臟的定位表達(dá)。
　　 結(jié)果：第8周模型組腎組織IL-17mRNA水平、IL-17和IL-1β蛋白水平均高于正常組（均P<0.05）；第12周均進(jìn)一步升高（P<0.01），并且IL-17與IL-1β、腎小球硬化指數(shù)均呈明顯的正相關(guān)（P<0.05）。
　　 結(jié)論：IL-17可能在阿霉素腎病大鼠模型發(fā)生腎小球硬化過程中起到重要的作用。
　　 第二部分：Th17/Treg細(xì)胞在兒童原發(fā)

3、性腎病綜合征中的表達(dá)及其作用研究
　　 目的：觀察原發(fā)性腎病綜合征（PNS）患兒Th17細(xì)胞和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）及其相關(guān)因子的在外周血及腎組織中的表達(dá)，初步探討其在兒童PNS發(fā)病中的作用。
　　 方法：采用流式細(xì)胞儀檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞比例；Real-time PCR檢測PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表達(dá)；ELISA

4、分別檢測血清中IL-1β、IL-6、IL-10和TGF-β1的水平；免疫組化分析IL-17和IL-1β在PNS腎組織中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：單純型腎病（SNS）、腎炎型腎病（NNS）患兒Th17細(xì)胞及RORC、IL-23p19mRNA、IL-1β、IL-6的水平明顯高于正常組（均P<0.05），且NNS組患兒以上指標(biāo)均明顯高于SNS組（均P<0.05）；SNS、NNS組患兒Treg細(xì)胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表

5、達(dá)明顯低于正常組（均P<0.05），其中兩組疾病患兒血清TGF-β1的水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），其余指標(biāo)NNS組明顯低于SNS組（均P<0.05）；隨著PNS患兒腎臟病理嚴(yán)重程度的增加，IL-17和IL-1β的表達(dá)逐漸增加（FSGS>MsPGN>MCNS）。
　　 結(jié)論：Th17/Treg細(xì)胞功能失衡可能在兒童PNS的發(fā)病中起到重要作用，其失調(diào)程度可能與PNS的臨床表現(xiàn)、對激素的敏感性、病理類型及預(yù)后有關(guān)。
　　

6、 第三部分：IL-17對足細(xì)胞相關(guān)分子和凋亡的影響及其分子機(jī)制的研究
　　 目的：研究IL-17對足細(xì)胞相關(guān)分子及其凋亡的影響，并探討可能的機(jī)制。
　　 方法：流式細(xì)胞儀檢測IL-17對足細(xì)胞凋亡的影響；Real-time PCR法檢測IL-17對足細(xì)胞相關(guān)分子Nephrin、WT1、Synaptopodin及陰離子蛋白Podocylaxin、凋亡受體Fas和FasL的mRNA的表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測足細(xì)胞Fas和FasL

7、蛋白的表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測足細(xì)胞WT1、Caspases8、Caspases3蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：IL-17減低足細(xì)胞陰離子蛋白Podocylaxin的表達(dá)（P<0.05）：同時(shí)IL-17可促進(jìn)足細(xì)胞凋亡，增加凋亡受體Fas的表達(dá)（P<0.01），并且增加其下游分子Caspases8、Caspases3的表達(dá)（P<0.01），對Nephrin、WT1、Synaptopodm的表達(dá)無影響（P>0.05）。
　　 結(jié)

8、論：IL-17可能通過抑制足細(xì)胞陰離子蛋白Podocylaxin表達(dá)，同時(shí)引起足細(xì)胞凋亡的方式來發(fā)揮對腎臟的損傷作用。
　　 第四部分：IL-17對系膜細(xì)胞功能的影響及其分子機(jī)制的研究
　　 目的：研究IL-17對系膜細(xì)胞增殖及分泌功能的影響，并探討可能的分子機(jī)制。
　　 方法：MTT法檢測IL-17對系膜細(xì)胞增殖的影響；ELISA檢測IL-17對系膜細(xì)胞分泌IL-1β、TNF-a、MCP-1的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)

9、法檢測系膜細(xì)胞NF-KB的表達(dá)。
　　 結(jié)果：IL-17對系膜細(xì)胞的增殖無影響（P>0.05）；IL-17可促進(jìn)系膜細(xì)胞分泌IL-1β（P<0.05），且呈濃度時(shí)間依賴性；同時(shí)IL-17誘導(dǎo)組NF-KB的表達(dá)高于空白對照組（P<0.05）；IL-17對系膜細(xì)胞TNF-a、MCP-1的分泌沒有影響（P>0.05）。
　　 結(jié)論：IL-17可能部分通過NF-KB途徑引起系膜細(xì)胞分泌炎癥因子IL-1β，加重腎臟局部的炎癥狀態(tài)，