產(chǎn)紫杉烷類內生真菌的分離及紫杉醇合成相關基因的克隆.pdf

1、上海交通大學博士學位論文產(chǎn)紫杉烷類內生真菌的分離及紫杉醇合成相關基因的克隆姓名：郭賓會申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：唐克軒20060401≥幕支童名事博士學位論文；毛杉中紫杉醇及其前體巴卡亭III的含量打下堅實的基礎和提供候選基因。靖主要研究結果如下：1)通過表面消毒除菌的方法從野生的南方紅豆杉中分離到21個不同的內生真菌菌株；根據(jù)分離菌的生理特性和形態(tài)學特點，包括培養(yǎng)基、分泌色素、菌落的生長速度、菌絲體以及孢子

2、的特征等，對其中的8個菌株進行了分類鑒定，其余菌株由于形態(tài)特征不夠明顯尚未做鑒定?！?1經(jīng)HPLC、LCMS對21個內生真菌菌株發(fā)酵液提取物進行檢測，結果表明：在編號為X12的內生真菌發(fā)酵液提取物中同時檢測f到紫杉烷類物質BaccatinIII和Taxol的存在，所以將其命名為B1r2；MIT(四甲基偶氮唑藍)實驗結果進一步表明，BT2菌株發(fā)酵液提取物同紫杉醇標準品一樣，都能有效抑制或殺死肝癌細胞系7402和肺癌細胞系A549腫瘤細胞

3、。根據(jù)其生理特性和形態(tài)學特征，BT2菌株為一一‘●‘_●』“^一絲狀內生真菌，歸屬于束絲菌屬(Ozoniumsp)，不同于以前任何報，砷道的產(chǎn)紫杉烷類物質的內生真菌?！瘛?)以BT2菌株基因組DNA和cDNA為模板，同源克隆到了一個細胞色素P450家系的紫杉烷類1013羥化酶基因(GenBankAccessionNoAY836677)及其cDNA序YlJ(GenBankAccessionNo，AY907826)。在Genbank中的Bl