帕歌斯對慢性腎衰大鼠腎功能的影響.pdf

1、慢性疼痛是困擾人類日常生活的最常見問題,對于疼痛的患者來說,慢性疼痛不僅僅是一種痛苦的體驗,還會帶來孤獨感和絕望感,因此慢性疼痛作為一種疾病及早治療,有效地控制并改善生活質(zhì)量是臨床慢性疼痛治療的最終目標(biāo)。慢性疼痛包括骨關(guān)節(jié)痛、腰背痛以及神經(jīng)病理性疼痛等。事實上無論是在發(fā)展中國家或是在發(fā)達(dá)國家,慢性疼痛發(fā)病率都相當(dāng)高。眾所周知,在慢性腎衰(CRF)患者中慢性疼痛是其常見癥狀之一；肌肉、骨骼系統(tǒng)疾患引起的慢性疼痛是特別突出的問題,而患有肌肉

2、、骨骼系統(tǒng)疾病的患者往往合并腎臟的損害,這就給臨床治療帶來許多的問題；臨床上對于并發(fā)慢性腎功能不全的患者更易發(fā)生藥物不良反應(yīng)及藥物相互之間的作用。
　　 慢性疼痛一般以藥物治療為主,主要鎮(zhèn)痛藥物有乙酰氨基酚、非甾體抗炎藥(NSAIDs)和阿片類藥物。NSAIDs具有抗炎作用和中等程度的鎮(zhèn)痛作用,對關(guān)節(jié)痛、肌肉痛和神經(jīng)痛等慢性疼痛有較好的鎮(zhèn)痛效果,對炎癥性疼痛療效更好,長期應(yīng)用無耐受性和成癮性,因此,NSAIDs作為慢性疼痛的鎮(zhèn)痛

3、藥物主體是合理的。雖然在過去的許多臨床研究和藥品上市后對NSAIDs的療效和毒性進(jìn)行了廣泛的評估,但目前對于這些不良反應(yīng)的嚴(yán)重性和發(fā)生率仍然缺乏足夠的定量數(shù)據(jù)。在所有的不良反應(yīng)中,對于腎功能損害這種嚴(yán)重不良反應(yīng)我們更加應(yīng)該給予足夠的關(guān)注。常用的NSAIDs物往往禁用或慎用于慢性腎功能不全患者；因NSAIDs有抑制前列腺素合成作用,會減少腎臟血流量,尤其老年人的腎臟隨著年齡增長其功能也相應(yīng)減退,故老年人長期服用NSAIDs要慎重。試圖為C

4、RF患者提供安全的止痛藥物是臨床疼痛治療中的越來越迫切需要解決的問題之一。
　　 帕歌斯是一種生長于非洲沙漠和草原的被稱作“魔鬼爪”(Devil's Claw)植物的根提取物的藥物,魔鬼爪在20世紀(jì)初由非洲引入歐洲,被《英國植物藥典》收載,作為抗風(fēng)濕植物藥廣泛應(yīng)用。近40年歐洲對該藥進(jìn)行了較深入的基礎(chǔ)和臨床研究?；A(chǔ)研究證實帕歌斯具有抗風(fēng)濕、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。在臨床上國內(nèi)外多項對照研究表明帕歌斯在治療骨關(guān)節(jié)疾病中的鎮(zhèn)痛效果顯著。帕

5、歌斯起效時間2～3天,消腫止痛等消炎作用較快,與NSAIDs相似。對血沉(ESR)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)及類風(fēng)濕因子(RF)無改變。相關(guān)報道表明與NSAIDs抑制環(huán)氧化酶的作用機(jī)制不同帕歌斯還具有具有利尿、排石和降低尿酸的作用。而關(guān)于帕歌斯在對腎臟疾患尤其是腎功能衰竭進(jìn)行鎮(zhèn)痛方面的腎保護(hù)作用及其機(jī)制的動物實驗尚缺乏研究。
　　 為了探討帕歌斯腎保護(hù)作用及其機(jī)制,我們建立了腺嘌呤誘導(dǎo)的大鼠CRF這一經(jīng)典模型。選擇已知對腎功能有損

6、害作用的藥物雙氯酚酸作為陽性對照藥物,使用帕歌斯的不同劑量組同時用于慢性腎功能衰竭大鼠,探討帕歌斯對大鼠腎功能的影響。
　　 本文分二部分闡述如下。
　　 第一部分 慢性腎功能衰竭動物模型的建立
　　 目的:為CRF患者提供安全的止痛藥物是臨床疼痛治療中的常見問題。因此提供與臨床相關(guān)性好的CRF動物模型,對研究其發(fā)病機(jī)理,探討腎臟組織形態(tài)學(xué)變化,了解生化指標(biāo),評估治療藥物療效和副作用均具重要意義。
　　

7、方法:SD雄性大鼠52只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,分別逐個稱重,隨機(jī)分為正常組14只,造模組38只。正常組每日給予等量生理鹽水(5ml/只/日)灌胃,造模組每日灌服腺嘌呤。腺嘌呤以生理鹽水配成25％濃度混懸液,按2S0mg/kg/d給予,造模連續(xù)用藥21天。造模過程中大鼠自由進(jìn)食、飲水。隨飼養(yǎng)天數(shù)的增加,大鼠每日逐個稱重,并記錄大鼠體重。造模后第22天,用代謝籠收集24h尿,測24h尿量、24h尿蛋定量。以2％戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉、處

8、死,心臟穿刺取血,1500rpm離心5min分離血漿,尿和血清置-70℃保存以備測BUN、Scr、Hb、Ca、P等指標(biāo)。取右腎放入10％福爾馬林中固定,脫水、浸蠟、包埋、切片,供HE染色和Masson染色,光鏡下觀察病理改變。
　　 結(jié)果:所有大鼠的標(biāo)本收集均在第22天完成。造模期間模型組大鼠進(jìn)食量減少,體重下降,精神萎靡,體毛干枯不齊。正常組大鼠飲食如常,體重增加,反應(yīng)靈敏,體毛順滑有光澤。造模21天后模型組與正常組比較均顯示

9、腎重/體重升高,24h尿量、24h尿蛋白定量、BUN、Scr明顯升高,Hb降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。造模過程中大鼠無死亡。
　　 結(jié)論:成功建造慢性腎功能衰竭大鼠模型。
　　 第二部分 帕歌斯對慢性腎衰大鼠腎臟的影響
　　 目的:帕歌斯具有抗炎、抗風(fēng)濕、鎮(zhèn)痛作用。目前多用于骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性疾病及慢性疼痛治療,可用于肝臟腎臟代謝紊亂的患者。與NSAIDs相比,無明顯胃腸、心腎副作用。本部分實驗應(yīng)用帕

10、歌斯對大鼠CRF模型進(jìn)行動物實驗,以探討帕歌斯腎保護(hù)作用及其可能的機(jī)制
　　 方法:取造模組成功造模后的32只大鼠隨機(jī)分為模型組、帕歌斯低劑量組、帕歌斯高劑量組、雙氯芬酸組,每組各8只。治療以帕歌斯低劑量組為臨床等效組(按成人每公斤體重用量的6倍折算),以302.4mg/(kg·d)灌胃；高劑量組(低劑量組的3倍),按907.2mg/(kg·d)灌胃。雙氯芬酸作為陽性對照組用生理鹽水配成20％溶液,按5.25mg/(kg·d)灌

11、胃。正常組和模型組給予等量生理鹽水,共治療30天。治療過程中大鼠自由進(jìn)食、飲水。治療后第31天,用代謝籠收集24h尿,測24h尿量、24h尿蛋定量。以2％戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉、處死,心臟穿刺取血,1500rpm離心5rain分離血漿,尿和血清置-70℃保存測BUN、Scr、Hb、Ca、P等指標(biāo)。取右腎放入10％福爾馬林中固定,脫水、浸蠟、包埋、切片,供HE染色和Masson染色,光鏡下觀察各組病理改變。SABC法檢測TGF-β1

12、在腎組織中的表達(dá)。
　　 結(jié)果:所有大鼠的標(biāo)本收集均在第31天完成,治療用藥過程中陽性對照雙氯芬酸組2只大鼠死亡。治療過程中模型組大鼠進(jìn)食量減少,體重下降,精神萎靡,體毛干枯不齊。正常組大鼠飲食如常,體重增加,反應(yīng)靈敏,體毛順滑有光澤。帕歌斯高、低劑量組的24h尿量、24h尿蛋白定量、腎重/體重、BUN、Scr、Hb、電解質(zhì)分別與模型組比較,兩組之間無顯著差異(p>0.05),帕歌斯高、低劑量組組間比較也無顯著差異(p>0.05

13、)；雙氯芬酸組的上述數(shù)值分別與模型組及帕歌斯高、低組比較均有顯著性差異。本研究中腎臟常規(guī)病理及Masson染色結(jié)果表明帕歌斯低、高劑量組腎臟改變及纖維化組織增生程度均較輕,雙氯芬酸組損傷最重。本實驗免疫組化顯示TGF-β1在帕歌斯高、低劑量組表達(dá)較少,在雙氯芬酸組表達(dá)較多。帕歌斯沒有進(jìn)一步加重CRF大鼠腎小管-間質(zhì)損害,提示與雙氯芬酸相比較帕歌斯是一種安全、無腎毒性的藥物。
　　 結(jié)論:本實驗研究表明給CRF大鼠分別灌服低、高劑

14、量帕歌斯30天后腎重/體重、腎功能未進(jìn)一步惡化,貧血及電解質(zhì)紊亂亦未見進(jìn)一步加重。但是CRF大鼠灌服雙氯芬酸過程中,先后有2只大鼠死亡,灌服30天后,腎功能、貧血及電解質(zhì)紊亂進(jìn)一步加重。腎臟常規(guī)病理及Masson染色結(jié)果表明帕歌斯低、高劑量組對腎臟改變及纖維化組織增生程度均較輕。TGF-β1在帕歌斯高、低劑量組表達(dá)較少,帕歌斯可能通過抑制其在腎組織的表達(dá),減少其過度積聚,延緩腎間質(zhì)纖維化。帕歌斯對腺嘌呤所致CRF的保護(hù)機(jī)制可能與減少TG

15、F-β1在腎組織中的表達(dá)有關(guān)。
　　 總結(jié)
　　 本文我們使用腺嘌呤誘導(dǎo)建立了大鼠CRF這一經(jīng)典模型。并運用大鼠CRF模型研究帕歌斯對CRF大鼠腎臟的影響,結(jié)果表明CRF大鼠分別灌服低、高劑量帕歌斯30天后腎重/體重、腎功能未進(jìn)一步惡化,貧血及電解質(zhì)紊亂亦未見進(jìn)一步加重。腎臟常規(guī)病理及Masson染色結(jié)果表明帕歌斯低、高劑量組對腎臟改變及纖維化組織增生程度均較輕。本實驗免疫組化顯示TGF-β1在帕歌斯高、低劑量組表達(dá)較少