一種卵形孢霉對(duì)原人參二醇型皂甙的生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、人參是我國(guó)名貴中藥，其主要活性成分是人參皂甙。存在于人參中的天然人參皂甙活性較低，而那些在白參中幾乎不存在的稀有人參皂甙往往有較好的藥理學(xué)活性。在結(jié)構(gòu)上，這些稀有人參皂甙與人參中含量較多的人參皂甙Rb1、Rb2、Re等相比，僅僅是在糖基側(cè)鏈上有所不同。因此，可以通過(guò)改造人參皂甙的結(jié)構(gòu)來(lái)制備稀有人參皂甙。目前，人參皂甙改造的方法集中在化學(xué)法和生物轉(zhuǎn)化法，而生物轉(zhuǎn)化法作為一種環(huán)保型的工藝，以其高效率、低污染、高選擇性等優(yōu)點(diǎn)成為皂甙轉(zhuǎn)化的首選

2、方法。本論文的內(nèi)容是篩選能夠轉(zhuǎn)化原人參二醇型皂甙Rb1、Rb2、Re混合物的植物病原真菌，并選取其中一種真菌深入研究其轉(zhuǎn)化途徑。
　　本論文的第一部分篩選了22種植物病原真菌，探究其轉(zhuǎn)化原人參二醇型皂甙Rb1、Rb2、Re混合物為稀有人參皂甙的能力，其中僅有2種真菌不能對(duì)底物進(jìn)行轉(zhuǎn)化，其余20種真菌轉(zhuǎn)化底物的結(jié)果如下:有8種真菌可以將底物轉(zhuǎn)化成Rd，Rd是主要的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物;有6種真菌轉(zhuǎn)化底物的終產(chǎn)物是F2，中間產(chǎn)物主要是Rd;有6種

3、真菌轉(zhuǎn)化底物的終產(chǎn)物是C-K，中間產(chǎn)物主要有Rd和F2。由于1.91號(hào)真菌轉(zhuǎn)化底物為稀有人參皂甙C-K的效率較高，故選取1.91號(hào)真菌初步進(jìn)行了形態(tài)學(xué)鑒定，1.91號(hào)真菌屬于半知菌類(lèi)叢梗孢目叢梗孢科卵形孢霉屬（Oospora Wallr.）。
　　本論文的第二部分研究了卵形孢霉（Oospora Wallr.）及其胞外糖苷酶對(duì)二醇型人參皂甙Rb1、Rb2、Rc的轉(zhuǎn)化過(guò)程。結(jié)果表明:卵形孢霉轉(zhuǎn)化人參皂甙Rb1的途徑為:Rb1→Rd→F

4、2→C-K;轉(zhuǎn)化人參皂甙Rb2的途徑為:Rb2→C-O→C-Y。由于原人參二醇型皂甙中Rb1的含量最高，因此優(yōu)化了卵形孢霉轉(zhuǎn)化人參皂甙Rb1的條件:最佳底物添加時(shí)間是孢子預(yù)培養(yǎng)12h后;轉(zhuǎn)化最適pH值是5.0-6.0;轉(zhuǎn)化最適溫度為45℃。采用V8汁培養(yǎng)基對(duì)卵形孢霉進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，得到胞外糖苷酶，對(duì)其進(jìn)一步純化，得到糖苷酶GE-Ⅰ。GE-Ⅰ對(duì)Rb1、Rb2的轉(zhuǎn)化過(guò)程為:Rb1→Rd→F2→C-K;Rb2→C-O→C-Y→C-K。根據(jù)糖苷酶