三氧化二砷對MRL-lpr小鼠基因甲基化的影響.pdf

1、目的： 通過三氧化二砷(ArsenicTrioxide,ATO)對MRL/lpr狼瘡小鼠的免疫狀況及基因甲基化的研究，來探究該藥對系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)的治療作用及進一步探討其作用機制是否與其逆轉狼瘡小鼠基因低甲基化狀態(tài)有關。 方法： 將12周齡MRL/lpr狼瘡小鼠36只，隨機分為ATO組、5-氮胞苷(5-azacytidine,5-Aza)組及生理鹽水(

2、normalsaline,NS)組，ATO組隔日腹腔注射三氧化二砷0.4mg·kg-1·d-1，5-Aza組隔日腹腔注射5-氮胞苷0.6mg·kg-1·-1，NS組隔日腹腔注射生理鹽水0.3ml，總療程為60天。另設C57小鼠20只為對照，隨機分為ATO組和NS組，同樣隔日予以腹腔注射給藥。 1.抗dsDNA抗體水平的測定：治療前后留取血清用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)測定MRL/lpr狼瘡小鼠血清中抗dsDNA抗體水平。

3、 2.器官重量的測定：總療程結束后，處死小鼠并稱取其脾臟、胸腺、兩側腋窩及頸部淋巴結的重量。 3.DNA甲基化水平的檢測：用試劑盒抽提小鼠脾臟、淋巴結、胸腺、血液四種組織的DNA，然后用氫氟酸水解各個樣本的DNA，最后采用高效液相方法檢測MRL/lpr小鼠以上四種組織各個樣本的DNA甲基化水平。 4.血常規(guī)的測定：總療程結束后，將MRL/lpr與C57小鼠的眼球摘除，取抗凝血(用0.2％EDTA，以1:9抗凝)用于血

4、常規(guī)的檢測。 結果： 1.血清抗ds-DNA抗體水平： 治療前ATO組小鼠血清抗ds-DNA抗體(A450nm)為0.6210±0.0762，NS組為0.6161±0.1073，5-Aza組為0.6251±0.1243，三組相比無顯著性差異；治療后ATO組血清ds-DNA抗體為0.4987±0.0811，NS組為0.9911±0.1143，5-Aza組為1.1870±0.1331，ATO組較其他兩組均有明顯降低(

5、P＜0.01)。 2.治療后MRL/lpr小鼠免疫器官的重量： 治療后小鼠脾臟重量ATO組為0.6105±0.1812g，NS組為0.9146±0.4287g，5-Aza組為0.9342±0.4458g，總淋巴結重量ATO組為0.7592±0.2798g，NS組1.306±0.5794g，5-Aza組為1.213±0.5007g，ATO組脾臟及淋巴結重量較其他兩組明顯減輕(P＜0.0.5)。而胸腺的重量在三組之間無明顯差

6、異。 3.治療后MRL/lpr小鼠各臟器的DNA甲基化水平： 脾臟的甲基化水平，ATO組(3.78±0.81)％、NS組(2.16±0.42)％、5-Aza組(1.39±0.15)％；淋巴結的甲基化水平，ATO組(2.38±0.54)％，NS組(1.71±0.24)％，5-Aza組(1.19±0.15)％，ATO組脾臟及淋巴結的甲基化水平較NS組及5-Aza組明顯提高(P＜0.05)；而ATO組血液及胸腺的甲基化水平與N

7、S組相比，無明顯差異(P＞0.05)。 4.治療后各組小鼠的血常規(guī)： 白細胞ATO組為(10.27±2.03)x109/L，NS組(11.08±2.66)x109/L；紅細胞ATO組為(8.07±1.79)x1012/L，NS組為(8.76±0.87)x1012/L；血小板ATO組為(543.67±91.89)x109/L，NS組為(319.33±192.07)x109/L。白細胞及紅細胞兩組相比并無顯著性差異，ATO組

8、血小板較其他兩組有明顯的升高(P＜0.05)。而C57小鼠中沒有發(fā)現(xiàn)在ATO組及NS組中有統(tǒng)計學差別。 結論： 1.ATO抑制MRL/lpr狼瘡小鼠的抗dsDNA抗體生成，同時能抑制免疫器官的增生，減輕脾臟及淋巴結腫大。 2.ATO能提高MRL/lpr狼瘡小鼠脾臟及淋巴結組織的DNA甲基化水平，由此推論，ATO可能通過提高狼瘡小鼠DNA甲基化水平，而抑制某些細胞因子及粘附分子的表達，從而達到抑制免疫并對SLE起治