慢性間歇低氧幼鼠認(rèn)知損傷機制的研究.pdf

1、目的：大量研究表明兒童阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructivesleepapneahypopneasyndrome，OSAHS)多伴有學(xué)習(xí)記憶不同程度的下降，給家庭和社會帶來較大的負(fù)擔(dān)，然而其潛在的分子機制尚不清楚。因此我們模擬OSAHS的典型病理生理特征，建立慢性間歇低氧幼鼠模型：(1)研究其空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化；(2)透射電鏡觀察海馬及前額葉皮層超微結(jié)構(gòu)的改變；(3)檢測海馬及前額葉皮層JNK1mRNA和磷酸化JNK

2、(p-JNK)蛋白的表達水平；(4)檢測海馬及前額葉皮層CREBmRNA和磷酸化CREB(p-CREB)蛋白的表達水平，從行為學(xué)及分子醫(yī)學(xué)角度以期探討慢性間歇低氧對幼鼠學(xué)習(xí)記憶力的影響及機制。 方法：SPF級健康雄性Sprague-Dawley(SD)幼鼠(3～4周齡)46只，體重為80～100克，進行八臂迷宮訓(xùn)練。10天后，其中6只因不能完成迷宮訓(xùn)練或繞臂被排除，訓(xùn)練成功的幼鼠隨機分為四組：間歇低氧2周組(2IH組，n=10)

3、、間歇低氧4周組(4IH組，n=10)、空氣對照2周組(2C組，n=10)、空氣對照4周組(4C組，n=10)。將2IH、4IH組幼鼠放入間歇低氧艙內(nèi)，計算機程控N2(99.99％)和O2(99.5％)輪流輸入，使艙內(nèi)低氧時氧濃度在9.0％±1.5％，復(fù)氧時氧濃度在21.0％±0.5％，艙內(nèi)CO2濃度＜0.1％，90s一次循環(huán)，每天7.5小時，每周7天；兩對照組除輸入氣體為壓縮空氣外，其他條件與前者相同。在慢性間歇低氧的第2周、4周，分

4、別對實驗組及對照組進行八臂迷宮測試。測試結(jié)束，每組隨機抽取1只幼鼠，以戊巴比妥鈉(35mg·kg-1bw,ip)麻醉后，0～4℃的4％戊二醛緩慢灌注，取腦后常規(guī)制作電鏡標(biāo)本，透射電鏡觀察海馬和前額皮層的超微結(jié)構(gòu)變化。余幼鼠立即處死，斷頭分離海馬及前額葉皮層，RT-PCR法和Westernblot法分別測海馬及前額葉皮層JNK1mRNA、CREBmRNA和p-JNK、p-CREB蛋白的表達. 結(jié)果： (1)2IH、4IH、

5、2C和4C組的參考記憶錯誤次數(shù)(RME)、工作記憶錯誤次數(shù)(WME)和總錯誤次數(shù)(TE)的比較均有顯著差別(P均＜0.01)，4組間兩兩間比較后發(fā)現(xiàn)除2IH與2C組之WME項外，其余各間歇低氧組記憶均受損，尤以4IH為甚，兩對照組之間無顯著性差異P＞0.05)。 (2)電鏡觀察顯示，2IH和4IH組幼鼠海馬和皮層神經(jīng)元出現(xiàn)細(xì)胞固縮，核膜模糊，染色質(zhì)凝集，且損傷范圍和程度以4IH組最重，呈現(xiàn)時間依賴性，而對照組則基本正常。

6、 (3)與相應(yīng)對照組比較，2IH、4IH組幼鼠海馬JNK1mRNA和p-JNK蛋白的表達顯著增加(P均＜0.01)，差異有顯著性，兩對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)；與相應(yīng)對照組比較，2IH、4IH組幼鼠前額葉皮層JNK1mRNA和p-JNK蛋白的表達顯著增加(P均＜0.05)，兩對照組之間無顯著性差異P＞0.05)。 (4)與相應(yīng)對照組相比，2IH、4IH組幼鼠海馬CREBmRNA和p-CREB蛋白的表達水平顯著降低(P

7、均＜0.05)，且以4IH組最低(P均＜0.01)，差異有顯著性，兩對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)；與對照組相比，2IH、4IH組幼鼠前額葉皮層CREBmRNA和p-CREB蛋白表達顯著降低(P均＜0.01)，差異有顯著性，兩對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論： (1)慢性間歇低氧幼鼠存在學(xué)習(xí)記憶障礙，且呈現(xiàn)時間依賴性。 (2)慢性間歇低氧可導(dǎo)致幼鼠海馬及前額葉皮層出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)改變。