鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶在兔膽囊切除術(shù)后早期Oddi括約肌改變中的作用研究.pdf

1、Oddi括約肌功能障礙(sphincter of Oddi dysfunction，SOD)是由Oddi括約肌(sphincter of Oddi，SO)處梗阻所導(dǎo)致的一組以慢性膽道疼痛或復(fù)發(fā)性胰腺炎為主要表現(xiàn)的綜合癥，是引起膽囊切除術(shù)后綜合征( post-cholecystectomy syndrome，PCS)的重要原因之一，多發(fā)于膽囊切除術(shù)后。由于其發(fā)病機(jī)制不清，SOD診治一直困擾著臨床醫(yī)生和患者。目前研究多是從SO的運動調(diào)節(jié)去闡

2、明SO的運動異常，但均不能確切解釋這一現(xiàn)象，需進(jìn)一步建立膽囊切除術(shù)模型研究膽囊切除術(shù)后SO的組織結(jié)構(gòu)改變及可能的機(jī)制。SO是位于膽管、胰管和十二指腸結(jié)合部位的神經(jīng)肌肉復(fù)合體，受神經(jīng)體液的雙重調(diào)節(jié)，且與膽囊問存在局部神經(jīng)反射。Luman等報道膽囊切除術(shù)至少一過性的抑制了藥理劑量的CCK對SO的抑制作用。Wang等對高膽固醇血癥兔SOD模型的研究中發(fā)現(xiàn)SO細(xì)胞內(nèi)存在著Ca2+過載現(xiàn)象。而鈣通道阻滯劑如硝苯地平給藥可降低無癥狀志愿者及有癥狀S

3、OD患者括約肌基礎(chǔ)壓，改善臨床癥狀。Ca2+濃度的改變不僅直接介導(dǎo)肌細(xì)胞收縮，還能調(diào)節(jié)其相關(guān)信號途徑引起下游效應(yīng)分子的改變。CaN-活化T細(xì)胞核因子(Nuclear Factor ofActivated TCells，NFAT)途徑廣泛存在于心肌、骨骼肌、逼尿肌、血管平滑肌等組織細(xì)胞，在T細(xì)胞活化中其關(guān)鍵作用，并參與心肌、骨骼肌及逼尿肌肥大的發(fā)生。在病理性心肌肥大的研究中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度升高，迄今發(fā)現(xiàn)的唯一受Ca2+/鈣調(diào)素(

4、 Calmodulin，CaM)調(diào)節(jié)的絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN)被激活，經(jīng)一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，活化肥大相關(guān)基因，使肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain，MHC由以α-MHC為主向以β-MHC為主演變，心臟成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)合成增加，引起心肌細(xì)胞肥大。為此，本實驗行兔膽囊切除，檢測SO壓力變化，觀察術(shù)后SO組織結(jié)構(gòu)及功能蛋白表達(dá)變化，并檢測術(shù)后早期SO組織內(nèi)鈣調(diào)神經(jīng)磷

5、酸酶(CaN)催化亞單位α、β(CnAα、CnAβ)2種亞型的表達(dá)變化，探討其在膽囊切除術(shù)后SOD發(fā)生中的作用，為臨床治療提供新的思路。 目的: 行兔膽囊切除術(shù)，檢測SO壓力變化，觀察膽囊切除術(shù)后早期Oddi括約肌功能蛋白表達(dá)及結(jié)構(gòu)變化；檢測鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)催化亞單位α、β(CnAα、CnAβ)2種亞型的表達(dá)變化，探討其在這一過程中的作用。 方法: 68只新西蘭大白兔，分為4組，A組僅行開腹術(shù)暴露

6、膽囊，術(shù)后飼養(yǎng)4周，B、C、D組行膽囊切除術(shù)，分別飼養(yǎng)2、4、8周。A組、C組各8只行Oddi括約肌測壓后取Oddi括約肌標(biāo)本行HE染色；其余直接切取Oddi括約肌標(biāo)本后行相應(yīng)檢測：A、D組各取2只行透射電鏡檢測；A、B、C、D組各12只行Western blot檢測肌球蛋白重鏈(MHC)表達(dá)變化，RT-PCR、Western blot檢測CnAα、CnAβmRNA和蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果: ①膽囊切除4周后SO基礎(chǔ)壓和鋒

7、壓明顯增高②透射電鏡示：與對照組比平滑肌細(xì)胞內(nèi)密體增多；Western blot可檢測到術(shù)后2周、4周、8周MHC蛋白表達(dá)逐漸增加(P<0.01)。⑨RT-PCR可檢測到術(shù)后4周與對照組比CnAp mRNA表達(dá)增加，8周下降(P<0.01)。Westem blot可檢測到術(shù)后2周、4周、8周CnAp蛋白表達(dá)逐漸增加(P<0.01)。CnAa mRNA及蛋白表達(dá)均無顯著變化。 結(jié)論： 1.膽囊切除術(shù)后SO的運動功能增強(qiáng)。