應(yīng)用免疫分型芯片對臨床急性白血病細(xì)胞膜相關(guān)抗原的檢測.pdf

1、目的: 目前白血病的免疫分型診斷主要依靠用已知的單克隆抗體(McAb)去鑒定白血病細(xì)胞膜表面或細(xì)胞內(nèi)部的抗原—CD抗原(cluster of differentiation)，根據(jù)不同抗原在不同階段的出現(xiàn)與消失，決定白細(xì)胞所屬的系列及分化階段，做出免疫學(xué)診斷。當(dāng)前臨床上進行白血病的免疫分型主要是應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)及免疫組化技術(shù)，其分型受到標(biāo)本量、價格、程序等的限制，而且一次實驗只能分析1～4個表面抗原，漏掉了大量監(jiān)測機體免疫狀態(tài)的表

2、面抗原指標(biāo)。隨著生物芯片技術(shù)的發(fā)展，學(xué)者們開始應(yīng)用這種高通量、并行性、集成化的技術(shù)平臺進行白血病的免疫分型研究。本實驗構(gòu)建的用于急性白血病免疫學(xué)分型的細(xì)胞芯片就是利用抗原、抗體特異性結(jié)合的原理，將白細(xì)胞表面分化抗原單克隆抗體固定于載體上，形成抗體點陣。不同的單克隆抗體能夠自動識別并捕獲表達(dá)相應(yīng)表面分化抗原的細(xì)胞，從而對白血病進行免疫學(xué)分型。將芯片的診斷結(jié)果與臨床對急性白血病患者外周血白細(xì)胞的系列分型結(jié)果進行比較，驗證芯片診斷的準(zhǔn)確性。同

3、時采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對芯片捕獲的白血病細(xì)胞膜表面相關(guān)抗原CD6、LTK、CaSR的表達(dá)進行檢測，旨在為臨床診斷、靶向治療及預(yù)后提供快速、簡便、完整、準(zhǔn)確的免疫學(xué)資料。 方法: 結(jié)合本實驗室現(xiàn)有抗體情況對國際上公認(rèn)的急性白血病免疫分型的一線、二線抗體進行篩選，采用最佳的抗體點陣組合構(gòu)建急性白血病免疫分型芯片。 用急性白血病免疫分型芯片對35例臨床初診的急性白血病人的外周血進行免疫分型：提取的白細(xì)胞經(jīng)吖啶橙染色

4、后孵育芯片，熒光圖像掃描儀掃描觀察點陣捕獲細(xì)胞的情況，確定細(xì)胞膜上抗原的表達(dá)。瑞氏—姬姆薩染色后顯微鏡下觀察芯片上各抗體點捕獲細(xì)胞的形態(tài)，免疫學(xué)結(jié)果與形態(tài)學(xué)相結(jié)合進行分型并與臨床檢測結(jié)果進行比較。 檢測35例臨床急性白血病患者外周血白血病細(xì)胞膜表面CD6、LTK、CaSR三種膜相關(guān)抗原的表達(dá)情況：對芯片捕獲的白血病細(xì)胞采用間接免疫熒光法檢測膜相關(guān)抗原并在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。 結(jié)果: 急性白血病免疫分型芯片的點陣

5、抗體為：T—ALL：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8—1、CD8—2、TCRαβ、TCRδγB—ALL：CD10、CD19、CD20、CD22、CD24、CD79b、k、λAML：CD13、CD14、CD15、CD33、CD41、CD61、CD64、CD103、CD235a非系列特異性：TdT、HLA—DR、CD34 根據(jù)熒光圖片掃描儀掃描芯片得到的抗原表達(dá)情況并結(jié)合顯微鏡下觀察點陣捕獲的細(xì)胞形態(tài)，對35例

6、臨床急性白血病患者的外周血進行免疫分型，T—ALL11例，B—ALL14例，AML10例，所得系列分型結(jié)果與臨床檢測結(jié)果一致，證明了芯片診斷的準(zhǔn)確性。 對35例臨床急性白血病患者的外周血進行檢測，細(xì)胞芯片上捕獲的白血病細(xì)胞采用間接免疫熒光法檢測膜相關(guān)抗原，用一抗CD6，LTK，CaSR的濃度為1：30037℃孵育30分鐘，熒光二抗?jié)舛葹?：20037℃孵育20分鐘最佳。熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞膜表面相關(guān)抗原T—ALL表達(dá)CD6，B—

7、ALL表達(dá)LTK，AML表達(dá)CaSR。 結(jié)論: 本實驗構(gòu)建的急性白血病免疫分型芯片對急性白血病的系列分型結(jié)果與臨床分型結(jié)果一致，急性白血病患者外周血白血病細(xì)胞膜表面相關(guān)抗原CD6在T—ALL表達(dá)、LTK在B—ALL表達(dá)、CaSR在AML表達(dá)具有特異性，可作為臨床白血病免疫學(xué)分型及抗體靶向治療的依據(jù)。本實驗室研制的白血病免疫分型細(xì)胞芯片重復(fù)性和穩(wěn)定性好，為臨床白血病免疫分型提供了一種更快速簡便、高通量、并行性、集成化的技術(shù)