成人急性白血病三色標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)免疫分型與臨床分析.pdf

1、目的：白血病免疫學(xué)分型是利用單克隆抗體(monoclonalantibody，McAb)檢測(cè)白血病細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿抗原，分析其表現(xiàn)型，以了解被測(cè)白血病細(xì)胞所屬細(xì)胞系列及其分化程度。白血病細(xì)胞是造血細(xì)胞在某一分化階段的大量積累，表達(dá)與之相應(yīng)的造血細(xì)胞分化抗原，這些抗原可作為鑒別和分類(lèi)造血細(xì)胞的標(biāo)記。因此可用造血細(xì)胞分化抗原來(lái)標(biāo)記檢測(cè)白血病細(xì)胞。但是白血病細(xì)胞畢竟不是正常造血細(xì)胞，其抗原表達(dá)與正常造血細(xì)胞并不完全相同，常有丟失某一分化發(fā)

2、育階段正常應(yīng)有的抗原，或表達(dá)某一分化發(fā)育階段正常不應(yīng)有的抗原，或表達(dá)其他系列抗原，部分喪失了系列專(zhuān)一性和分化的嚴(yán)格性。至今尚未發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞特異性抗原。因此研究急性白血病的抗原表達(dá)規(guī)律很必要。目前，HLDA(HumanLeukemiaDifferentiationAntigen)國(guó)際會(huì)議已正式命名393個(gè)白細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)分子抗原(ClusterofDifferentiation，CD)[1]。臨床常用白血病細(xì)胞對(duì)系列相關(guān)抗原(CD)的

3、反應(yīng)來(lái)確定T-ALL(T-acutelymphocyticleukemia)，B-ALL(B-acutelymphocyticleukemia)及AML(acutemyelocyticleukemia)細(xì)胞的來(lái)源和分化階段。本研究利用CD45/SSC設(shè)門(mén)三色標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)分析急性白血病(acuteleukemia，AL)免疫表型特征及其在臨床診斷、治療及預(yù)后中的意義。 材料與方法：1.研究對(duì)象為鄭州大學(xué)第一附院于2000年1月-

4、2005年11月間門(mén)診及住院的初診AL病例310例。男192例，女118例，年齡14歲-85歲(中位年齡35.6歲)。所有患者均經(jīng)形態(tài)學(xué)檢查、細(xì)胞組織化學(xué)染色，診斷為AL，再進(jìn)行流式細(xì)胞儀免疫表型分析。2.取患者經(jīng)肝素抗凝的骨髓或靜脈血1-2ml，用FACSCan型流式細(xì)胞儀(美國(guó)B-D公司)，CD45/SSC設(shè)門(mén)分析R2內(nèi)細(xì)胞。AL的免疫分型標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[2]。急性混合細(xì)胞白血病(Acutemixedlineagedleukemia，

5、AMLL)免疫分型標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)歐洲白血病免疫特征研究組(EuropeanGroupfortheImmunologicalCharacterizationofLeukemia，EGIL)的積分標(biāo)準(zhǔn)[3]。對(duì)于免疫分型診斷AML和ALL，同時(shí)又存在其他系抗原表達(dá)陽(yáng)性，而又不夠急性混合細(xì)胞白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)，則視為伴髓系相關(guān)抗原的急性淋巴細(xì)胞白血病(MY+ALL)和伴淋系相關(guān)抗原的急性髓細(xì)胞白血病(LY+AML)。3.治療方法：ALL患者采用標(biāo)準(zhǔn)VD

6、CP(長(zhǎng)春新堿+柔紅霉素+環(huán)磷酰胺+潑尼松)或VDCPL(VDCP+門(mén)冬酰胺酶)方案誘導(dǎo)治療2個(gè)療程。AML患者采用標(biāo)準(zhǔn)DA(柔紅霉素+阿糖胞苷)或HA(三尖杉?jí)A+阿糖胞苷)方案誘導(dǎo)治療2個(gè)療程。AMLL采用DOAP(柔紅霉素+長(zhǎng)春新堿+阿糖胞苷+潑尼松)方案治療2個(gè)療程。白血病完全緩解(completeremission，CR)標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[4]。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)。

7、 結(jié)果：(1)310例AL根據(jù)免疫表形特征，其中ALL133例，占42.9％；AML169例，占54.5％；AMLL8例，占2.6％。AML和ALL占97.4％，AMLL只占很少一部分。133例ALL中B-ALL99例，占74.4％；T-ALL34例，占25.6％。B-ALL發(fā)病率明顯高于T-ALL。169例AML中，M2發(fā)病率最高占42.1％，其次為M5，M4，M3。M0，M6和M723例，同期形態(tài)學(xué)僅診斷12例，而23例均經(jīng)免

8、疫學(xué)分型確診。10例形態(tài)學(xué)難以診斷的患者，經(jīng)免疫學(xué)分型確診8例為AMLL，2例ALL。此外，尚有3例形態(tài)學(xué)檢測(cè)結(jié)果與免疫學(xué)分型不一致(3例形態(tài)學(xué)似急性粒細(xì)胞白血病，免疫學(xué)分型結(jié)果為2例B-ALL，1例確診為M7)，結(jié)合臨床表現(xiàn)和化療效果證實(shí)免疫學(xué)分型的正確性。本組資料免疫分型診斷與FAB(FrenchAmericaBritish)診斷的相符率為92.3％。(2)B-ALL表達(dá)主要抗原為CD19(100％)、HLA-DR(89.9％)、C

9、D10(72.7％)、CD34(60.6％)；T-ALL表達(dá)主要抗原為CD7(94.1％)、CD2(50％)、HLA-DR(8.8％)。依據(jù)ALL免疫學(xué)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[3]，B-ALL可進(jìn)一步分為早期B前體ALL(Pro-B-ALL)、普通B-ALL(Common-All，cALL)、前B-ALL(Pre-B-ALL)、成熟B-ALL(Mature-B-ALL)四個(gè)亞型。99例B-ALL中Pro-B-ALL24例，治療13例，緩解13例，CR

10、率100％；cAll32例，治療18例，緩解15例，CR率83.3％；Pre-B-ALL39例，治療21例，緩解12例，CR率57.1％；Mature-B-ALL4例，治療1例，無(wú)緩解，CR率0。T-ALL中胸腺細(xì)胞型最常見(jiàn)，因資料太少，未進(jìn)一步分型。B-ALL治療53例，緩解40例，CR率62.3％；T-ALL治療15例，緩解4例，CR率26.7％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。本組資料顯示，部分B-ALL可伴有CD13、CD33

11、等髓系抗原表達(dá)，而所有ALL患者均不表達(dá)CD117。(3)169例急性髓細(xì)胞白血病(AML)表達(dá)主要抗原為CD13(73.9％)，CD33(70.4.4％)和CD117(72.3％)，三者在AML各亞型中均有不同程度表達(dá)。由于CD13，CD33可交叉表達(dá)于ALL中，而CD117未見(jiàn)表達(dá)；CD117的髓系特異性?xún)?yōu)于CD13，CD33。CD14,CD64在M4及M5中表達(dá)率較高，M3常表達(dá)CD13，CD33，而HLA-DR(humanleu

12、kocyteantigen)和CD34不表達(dá)；血小板糖蛋白(glycophorinantigen，Clya)主要表達(dá)于M6，Clya，CD41和CD42主要表達(dá)于M7患者。169例AML患者中，治療121例，緩解84例，CR率69.4％。本組資料顯示，部分AML可伴CD7，CD19，CD20等淋系抗原的表達(dá)。(4)133例ALL伴髓系抗原表達(dá)(MY+ALL)者53例，占39.9％，主要表達(dá)CD13和CD33等髓系抗原，CD14，CD11

13、7未見(jiàn)表達(dá)；169例AML伴淋系抗原表達(dá)(LY+AML)者62例，占36.6％，CD7表達(dá)率最高，其次為CD19，CD10,CD2。(5)62例LY+AML患者，治療36例，緩解19例，CR率為56.6％，顯著低于LY-AML的CR率76.5％(p＜0.05)；53例MY+ALL，治療32例，緩解10例，CR率32.1％，顯著低于MY-ALL的CR率70.2％(p＜0.01)。AMLL的CR率12.5％，分別與LY+AML的CR率55.

14、6％和MY+ALL的CR率31.2％比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。 結(jié)論(1)區(qū)分白血病細(xì)胞的系列來(lái)源，選擇CD33，CD13，CD14，CD117；CD19，CD10；CD7，CD2，CD5；CD34，HLA-DR等將會(huì)使絕大多數(shù)白血病患者得到正確分型。(2)CD117的髓系特異性?xún)?yōu)于CD13及CD33,CD117可為鑒別ALL及AML的重要標(biāo)志。(3)MY+ALL主要表達(dá)CD13和CD33等髓系抗原。 L