寡霉素誘導(dǎo)Balb-c3T3成纖維細(xì)胞AQP1的表達(dá).pdf

1、目的： 水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)維持細(xì)胞的正常代謝具有重要的作用。AQPs家族是一類位于細(xì)胞膜上對(duì)水有高度通透性的通道蛋白。目前，已克隆的哺乳動(dòng)物水通道家族有13個(gè)成員(AQP1～AQP12)，其中AQP1是發(fā)現(xiàn)最早研究最多的水通道蛋白，在體內(nèi)扮演著重要的角色，參與滲透壓驅(qū)動(dòng)下的水的轉(zhuǎn)運(yùn)，介導(dǎo)藥理作用，參與水腫的形成等。有研究顯示AQP1參與了細(xì)胞增殖與凋亡，但仍存在爭議。碘乙酰胺是一種特異性的磷酸肌酸激酶(CK)抑制劑，能使ATP轉(zhuǎn)運(yùn)障

2、礙，細(xì)胞能量代謝障礙，模擬細(xì)胞缺氧。我們的實(shí)驗(yàn)表明碘乙酰胺(IA)能夠誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞水通道蛋白1(AQP1)的大量表達(dá)，提示缺氧條件下AQP1參與細(xì)胞水的轉(zhuǎn)運(yùn)。寡霉素(Oligomycin)是一種線粒體ATP合成酶抑制劑，通過抑制線粒體ATP的合成造成細(xì)胞能量代謝障礙。為了進(jìn)一步探討能量代謝和水通道之間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)使用寡霉素作用于Balb/c3T3成纖維細(xì)胞，檢測AQP1表達(dá)量的變化。 方法： 1、試驗(yàn)分組：正常對(duì)

3、照組；寡霉素30umol4h，6h組；寡霉素4umol，10umol，40umol4h，6h組 2、Westem blot檢測AQP1蛋白表達(dá)量 3、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測AQP1表達(dá)的變化 結(jié)果： 寡霉素與細(xì)胞作用4小時(shí)后可見細(xì)胞變圓、體積增大；6小時(shí)后細(xì)胞核增大、細(xì)胞溶解壞死。免疫印跡和免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，細(xì)胞與30umol寡霉素作用4h后，AQP1表達(dá)開始增加，較0h增加60.1％，至6小時(shí)時(shí)AQP1表

4、達(dá)大量增加，較0h增加152.3％。分別用4umol、10umol、40umol不同濃度的寡霉素刺激成纖維細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)AQP1的表達(dá)呈濃度依賴性。 討論： 寡霉素是一種線粒體ATP合成酶抑制劑，他能抑制線粒體ATP的生成。寡霉素孵育Balb/c3T3成纖維細(xì)胞使細(xì)胞AQP1表達(dá)增多，且成劑量依賴性。這可能是因?yàn)楣衙杆匾种艫TP生成后，使泛素化降低(泛素化是一種負(fù)責(zé)降解蛋白質(zhì)的物質(zhì)，他具有能量依賴性)，AQP1降解減少，打破