能量代謝對(duì)Balb-c 3T3成纖維細(xì)胞水通道蛋白AQP1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)維持細(xì)胞的正常代謝具有重要作用。水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）作為水選擇性通道家族，在體內(nèi)扮演著重要角色。其中AQP1是發(fā)現(xiàn)最早研究最多的水通道蛋白，參與滲透壓驅(qū)動(dòng)下的水的轉(zhuǎn)運(yùn)，介導(dǎo)藥理作用和參與水腫的形成等。它在腎臟、肺、腦，和眼均有表達(dá)，其調(diào)節(jié)機(jī)制是復(fù)雜的。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用微管蛋白抑制劑諾考達(dá)唑（Nocodazole）、磷酸肌酸激酶抑制劑碘乙酰胺（Iodacetamide）和呼吸鏈抑制劑分

2、別作用于Balb/c 3T3小鼠成纖維細(xì)胞并觀察AQP1的表達(dá)量的變化，探討能量代謝對(duì)AQP1的影響。
　　 方法：
　　 采用體外培養(yǎng)的Balb/c 3T3小鼠成纖維細(xì)胞株。微管蛋白抑制劑諾考達(dá)唑（Nocodazole）、磷酸肌酸激酶抑制劑碘乙酰胺（Iodacetamide）和呼吸鏈抑制劑：一氧化氮（Nitric oxide）、抗霉素A（Antimycin A）、疊氮化鈉（Sodium azide）分別作用于該細(xì)胞，應(yīng)

3、用Western blotting分別檢測(cè)細(xì)胞在0小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)及0小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)AQP1的表達(dá).
　　 結(jié)果：
　　 諾考達(dá)唑、碘乙酰胺、一氧化氮、抗霉素A與細(xì)胞作用4小時(shí)后可見(jiàn)細(xì)胞變圓、體積增大；6小時(shí)后細(xì)胞核增大、細(xì)胞溶解壞死。sodium azide與細(xì)胞作用后光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變。免疫印跡結(jié)果顯示，Nocodazole和Iodacetamide與細(xì)胞作用4小時(shí)后，AQP1表達(dá)

4、開(kāi)始增加，至6小時(shí)時(shí)AQP1表達(dá)大量增加；并且具有濃度依賴(lài)性。疊氮化鈉與細(xì)胞作用2小時(shí)后，AQP1表達(dá)增加；4小時(shí)后AQP1表達(dá)量達(dá)到高峰；6小時(shí)后AQP1表達(dá)開(kāi)始逐漸下降.Nitric oxide和Antimycin A作用于細(xì)胞后 AQP1的表達(dá)量均無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論：
　　 微管蛋白抑制劑諾考達(dá)唑（Nocodazole）、磷酸肌酸激酶抑制劑碘乙酰胺（Iodacetamide）和呼吸鏈抑制劑均可誘導(dǎo)Balb/c