衰老成纖維細(xì)胞中Stat3的核定位及其對AngⅡ誘導(dǎo)TIMP-1表達(dá)上調(diào)的作用.pdf

1、衰老(Senescence)是指在細(xì)胞、組織水平的生理機(jī)能的進(jìn)行性丟失,是眾多不同的生理刺激激發(fā)細(xì)胞出現(xiàn)的一種最終的共同狀態(tài).大量實(shí)驗證明信號通路與衰老的起始和持續(xù)密切相關(guān).該實(shí)驗以用于研究體外復(fù)制衰老的人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38細(xì)胞為模型,探討細(xì)胞復(fù)制衰老過程中JAK/STAT信號通路的主要成員Stat3活性的變化、MMPs/TIMPs系統(tǒng)的變化、AngⅡ的作用及AngⅡ調(diào)控下游基因表達(dá)的有關(guān)信號通路,揭示衰老發(fā)生的機(jī)制.第一部

2、分實(shí)驗采用Western blotting、間接免疫熒光和EMSA等方法.第二部分實(shí)驗結(jié)果顯示,細(xì)胞在復(fù)制衰老過程中,Stat3的活性組成型或生長因子刺激后都有改變.第三部分實(shí)驗的明膠酶譜結(jié)果顯示:WI-38細(xì)胞主要分泌MMP-2,且年輕細(xì)胞中的MMP-2活性明顯強(qiáng)于衰老細(xì)胞,年輕細(xì)胞和衰老細(xì)胞中MMP-9的活性均較弱,兩者之間無明顯差別;AngⅡ刺激細(xì)胞48h時,年輕細(xì)胞和衰老細(xì)胞中MMP-2的活性稍有增加,兩者之間無差別,而AngⅡ

3、對MMP-9的活性無明顯影響.總之,細(xì)胞復(fù)制衰老過程中Stat3活性下降,不是衰老細(xì)胞Stat3磷酸化的減少,而是活化的Stat3核轉(zhuǎn)位受阻;AngⅡ可以誘導(dǎo)衰老細(xì)胞Stat3-DNA的結(jié)合;WI-38細(xì)胞主要分泌MMP-2,其活性在衰老細(xì)胞中明顯低于年輕細(xì)胞;衰老細(xì)胞TIMP-1蛋白的表達(dá)明顯高于年輕細(xì)胞,AngⅡ能夠上調(diào)衰老細(xì)胞TIMP-1的表達(dá),這一作用依賴于Stat3的活化.從該實(shí)驗可以看出,STAT信號通路介導(dǎo)了衰老信號,參與