溫度脅迫對漁業(yè)野生種中國小孔蛸精巢HSP70的影響.pdf

1、中國小孔蛸（Cistopus chinensis），又名嘉庚蛸（Octopus tankahkeei），隸屬軟體動物門頭足綱蛸科，為我國東南沿海潮間帶生活的重要經濟動物之一，其繁殖、發(fā)育與生長易受潮間帶環(huán)境變化的影響。HSP70是熱休克蛋白家族中重要的一員，當生物體受到環(huán)境變化脅迫時，細胞內 HSP70表達量增高，幫助變性蛋白恢復正常的構象，以發(fā)揮細胞保護的生物學功能。
　　為了解溫度脅迫下中國小孔蛸精巢中 HSP70的可能作用，

2、采用兼并 PCR和RACE等技術首次克隆得到該物種的HSP70基因，并進行了氨基酸序列分析、多重序列比對及進化樹構建。采用 RT-PCR技術分析了HSP70 mRNA在精巢、肝胰腺、腎臟、唾液腺、鰓和肌肉6個組織中的表達情況。將中國小孔蛸置于32℃海水中熱激2h，然后再置于13℃海水中暫養(yǎng)，并在不同的暫養(yǎng)時間（0–24h）取精巢組織，采用實時定量 PCR技術分析了不同暫養(yǎng)時間點精巢HSP70 mRNA的表達變化情況，采用透射電鏡技術觀察

3、了高溫刺激對精巢的超微結構損傷。此外，利用免疫組化技術檢測了HSP70蛋白在精巢中的分布。研究結構及結論簡要概括如下：
　　HSP70 cDNA全長為2471bp，包括89bp5’非編碼區(qū)（5’-UTR），426bp3’-UTR及1956bp開放閱讀框。編碼651個氨基酸，分子量與等電點分別為71.8kDa和5.34。氨基酸序列分析及多重序列比對結果顯示，HSP70屬于細胞質HSP70家族，進化樹顯示該物種 HSP70和文蛤等其他

4、軟體動物 HSP70具有較近的親緣關系。組織特異性表達分析表明，HSP70在精巢中表達量最高，腎臟和唾液腺次高，肝胰腺、鰓及肌肉中表達量相對較低。免疫組化實驗結果顯示，HSP70蛋白在精原細胞、精母細胞、精細胞及精子中均有表達。實時定量PCR結果顯示，同對照組相比，中國小孔蛸在32℃海水中熱激2h后，精巢HSP70 mRNA表達量出現短暫的下降；當轉移到13℃海水中暫養(yǎng)2h后，該基因表達量升高并達到峰值；在暫養(yǎng)4h和6h后表達量逐漸下降