溫度脅迫對小金蝠蛾幼蟲抗氧化酶活性及Hsp70表達量的影響.pdf

1、小金蝠蛾Hepialus xiaojinensis Tu.是鱗翅目（Lepidoptera）、蝙蝠蛾科（Hepialidae）、蝠蛾屬（Hepialus）昆蟲，是我國名貴中藥材冬蟲夏草的寄主昆蟲之一，所產冬蟲夏草具有較高的營養(yǎng)價值。為了改變冬蟲夏草供不應求的現狀，人工培植冬蟲夏草寄主昆蟲是解決資源匱乏的重要途徑。但是，從實際培養(yǎng)的過程中發(fā)現，人工飼養(yǎng)的小金蝠蛾存活率極低，而前期研究表明溫度是影響其存活率的一個重要因子。當環(huán)境溫度過高或者

2、過低時對于生物體來說即是一種逆境，而生物對溫度脅迫適應的機制研究目前主要集中在兩個方面：一是抗氧化保護酶，如超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）等；二是生物界普遍存在的熱激蛋白（Heat shock proteins,HSPs）。為了明確小金蝠蛾幼蟲對溫度脅迫適應性的機理，本文以小金蝠蛾的四齡幼蟲為研究對象，主要對受到溫度脅迫后的幼蟲體內的抗氧化酶活性以及熱激蛋白Hsp70的表達量進行了研究，旨在為提高人工飼養(yǎng)小金蝠蛾幼蟲存活

3、率提供理論參考。主要研究內容如下：
　　1.溫度脅迫對小金蝠蛾幼蟲抗氧化酶活性的影響
　　為了測定小金蝠蛾幼蟲在受到溫度脅迫過后體內的抗氧化酶活性變化，本實驗在室內設定了0℃、4℃、12℃、16℃、20℃、24℃、28℃7個溫度梯度，以8℃作為對照，設置4h和12h作為處理時間，將小金蝠蛾四齡幼蟲置于各溫度時間條件下進行脅迫處理。并測定不同溫度脅迫不同時間過后小金蝠蛾幼蟲體內幾種抗氧化酶的活性，以及脂質過氧化水平。結果表明，

4、溫度脅迫能夠引起小金蝠蛾幼蟲抗氧化酶活性的變化，其變化主要表現為：
　?。?）小金蝠蛾幼蟲的SOD無論是否受到溫度脅迫都具有較高活性，SOD在清除活性氧（ROS）的過程中發(fā)揮著巨大的作用；
　?。?）對照組的CAT活性顯著性低于各溫度處理組，溫度脅迫誘導了小金蝠蛾幼蟲的CAT發(fā)揮作用；
　?。?）不同溫度處理下小金蝠蛾POD的活力呈現上升趨勢，且在12h處理后CAT活力有所降低的時候，POD的活力會稍微上升，與CAT共

5、同作用控制H2O2的濃度；
　?。?）各溫度處理組的GSTs活性均低于對照組，經過12h的脅迫過后，GSTs活性呈現降低趨勢；
　?。?）作為脂質過氧化指標的丙二醛MDA，在24℃脅迫過后，含量有升高的趨勢；
　　（6）從T-AOC的測定結果可以看出，小金蝠蛾在受到溫度脅迫后，體內的總抗氧化能力顯著性升高，以維持幼蟲體內的氧化還原平衡狀態(tài)。
　　2.溫度脅迫對小金蝠蛾幼蟲脂肪體Hsp70表達量的影響
　　測

6、定了高溫脅迫下小金蝠蛾幼蟲脂肪體內熱激蛋白Hsp70的表達量的變化。利用?-actin作為內參基因，以含有Hsp70的cDNA為模板，結合實時熒光定量PCR技術分別檢測了16℃、24℃、28℃和32℃脅迫4h和12h過后Hsp70基因的相對表達量。結果表明，在受到4h溫度脅迫后，小金蝠蛾幼蟲脂肪體內的Hsp70的表達量有比較顯著的變化（P<0.05），且均高于對照組的表達量。小金蝠蛾幼蟲在受到16℃、24℃、28℃12h脅迫后，脂肪體內

7、的Hsp70的表達量有顯著性的變化（P<0.05），與對照相比，均高于對照組的表達量。短時間（4h）脅迫后Hsp70的表達量均高于長時間（12h）脅迫后的表達量。
　　3.基于小金蝠蛾幼蟲蛋白質組研究所鑒定到的熱激蛋白
　　熱激蛋白家族有分子伴侶的功能，分子伴侶是一類特殊的蛋白質分子，它與寡聚蛋白質的組裝、新生肽鏈的折疊以及蛋白質的跨膜運輸都有關系。但是其本身又并不參與蛋白質的組成。本實驗在室內設定了0℃、5℃、15℃、25