MAP4K4在膀胱癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義.pdf

1、目的：膀胱癌是目前世界上第九大癌癥，每年約有15萬(wàn)人死于膀胱癌。膀胱癌在中國(guó)的發(fā)病率和死亡率均占泌尿系腫瘤的首位，目前，中國(guó)男性膀胱癌的年發(fā)病率已達(dá)十萬(wàn)分之八，并呈逐年上升的趨勢(shì)。約70％為表淺腫瘤(Ta、T1、Tis)，這其中有50％-70％會(huì)復(fù)發(fā)，有10-20％進(jìn)展為肌層侵潤(rùn)性腫瘤(T2-T4)，根治性膀胱切除術(shù)后5年內(nèi)約有1/3會(huì)死于膀胱癌，可見(jiàn)膀胱癌是一種常見(jiàn)且復(fù)發(fā)率及死亡率較高的疾病，從基因水平進(jìn)行疾病的預(yù)防、診斷、治療具有巨

2、大的經(jīng)濟(jì)及社會(huì)價(jià)值。
　　 方法：首先，采用基因芯片技術(shù)對(duì)5對(duì)膀胱癌及癌旁組織的基因表達(dá)譜進(jìn)行初步研究，對(duì)比癌和癌旁組織的差異基因表達(dá)，篩選與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)基因。然后，采用PCR和Western blot技術(shù)進(jìn)一步從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測(cè)16對(duì)膀胱癌及癌旁組織中MAP4K4的表達(dá)情況，驗(yàn)證基因芯片的結(jié)果，并在156例石蠟包埋肌層浸潤(rùn)性膀胱癌切片中通過(guò)免疫組化檢驗(yàn)MAP4K4的蛋白表達(dá)情況，并觀察臨床病理參數(shù)與MAP4K4蛋白表

3、達(dá)水平的關(guān)系，以初步證實(shí)MAP4K4的臨床相關(guān)性。最后，通過(guò)慢病毒包裝的MAP4K4靶向shRNA轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞系T24，通過(guò)RT-PCR及Western blot驗(yàn)證干擾效率，篩選MAP4K4靶向干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，研究MAP4K4基因靶向干擾對(duì)膀胱癌細(xì)胞株T24生物學(xué)活性的影響:MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖能力、Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力、流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞周期或凋亡，并初步討論發(fā)揮影響的機(jī)制。
　　 結(jié)果：首先通過(guò)基因芯片技

4、術(shù)篩選出在膀胱癌與癌旁組織差異表達(dá)的基因MAP4K4，說(shuō)明該基因與膀胱癌的發(fā)生或發(fā)展可能有關(guān)。然后用新鮮膀胱癌及癌旁組織通過(guò)PCR及Western blot方法驗(yàn)證了基因芯片的結(jié)果:即MAP4K4在膀胱癌組織中的表達(dá)無(wú)論從mRNA水平還是蛋白水平均高于癌旁組織。通過(guò)對(duì)石蠟包埋病理切片的免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，MAP4K4在肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中普遍高表達(dá)，并且該基因高表達(dá)與淋巴血管侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，與多發(fā)腫瘤及分期相關(guān)，在淋巴結(jié)陰性的肌層

5、浸潤(rùn)性膀胱癌中是獨(dú)立于病理分期的預(yù)后不良因子。這說(shuō)明了MAP4K4基因具備重要了臨床相關(guān)性，值得進(jìn)一步研究。最后建立了MAP4K4靶向干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，顯示靶向干擾該基因后細(xì)胞增殖變慢，細(xì)胞侵襲力減弱，凋亡增加。
　　 結(jié)論：MAP4K4是一個(gè)與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因;MAP4K4的高表達(dá)與淋巴血管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，在淋巴結(jié)陰性的肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中有重要的判斷預(yù)后的價(jià)值;在膀胱癌細(xì)胞系中靶向干擾該基因后細(xì)胞增殖減慢，