人臍帶間充質干細胞聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術治療大鼠腦出血的實驗研究.pdf

1、研究背景：
　　腦出血是指原發(fā)性非外傷性腦實質出血，也稱自發(fā)性腦出血，是臨床上常見的血管性疾病，發(fā)病率、死亡率和致殘率均較高。除了血腫的占位效應及對周圍組織的直接破壞之外，繼發(fā)性腦損傷也是出血后腦損傷的主要原因，包括出血后血腫擴大壓迫腦組織，引起腦組織移位和損傷，繼發(fā)性炎性反應，產(chǎn)生的凝血素引起的凝血連鎖反應，紅細胞溶解產(chǎn)生的血紅蛋白所誘導的毒性反應，補體級聯(lián)反應以及神經(jīng)元凋亡等方面。因此，腦出血的及時治療十分關鍵。微創(chuàng)血腫抽吸術

2、一直是腦出血治療的研究熱點，近年來有關干細胞移植治療腦出血的實驗研究表明，干細胞進入大鼠腦組織中，替代了神經(jīng)元的功能，減輕腦出血后的炎性反應，并促進神經(jīng)功能的恢復，此方法可能會成為臨床治療腦出血的新方法。目前，仍未見臍帶間充質干細胞(HUC-MSCs)移植聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術治療腦出血的實驗研究。本實驗觀察了HUC-MSCs移植聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術對大鼠腦出血的療效，旨在為臨床進一步應用干細胞移植治療腦出血提供臨床實驗基礎。
　　研究

3、目的：
　　本實驗在建立大鼠腦出血模型的基礎上，探討HUC-MSCs移植聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術治療大鼠腦出血后腦內(nèi)P53的表達及神經(jīng)功能的恢復。
　　研究方法：
　　體外分離培養(yǎng)HUC-MSCs，移植前以BrdU標記，采用免疫細胞化學染色方法鑒定HUC-MSCs。將造模成功的120只SD大鼠隨機分為腦出血組、血腫抽吸組、細胞移植組、細胞移植聯(lián)合血腫抽吸組（聯(lián)合治療組），各組又分為1、3、7、14和30d5個時間點。向尾狀核

4、注入2μLⅣ型膠原酶建立腦出血模型，6h后將符合標準的模型，進行相應的處理后，各組分別于各時間點處死大鼠前，用改良的大鼠神經(jīng)功能缺損評分(mNSS)評價大鼠的神經(jīng)功能狀況，后采用免疫組織化學方法檢測大鼠腦出血周圍P53基因的表達及HUC-MSCs在腦組織的分布，并進行統(tǒng)計學處理。
　　研究結果：
　　1.HUC-MSCs細胞中CD29表達陽性，細胞漿為棕褐色;CD34表達陰性，細胞漿為藍色;CD44表達陽性，細胞膜為棕褐色;

5、CD90表達陽性，細胞漿為棕褐色;CD105表達陽性，細胞漿為棕褐色。腦出血組和血腫抽吸組未發(fā)現(xiàn)BrdU表達的陽性細胞，細胞移植組和聯(lián)合治療組則于出血腦區(qū)、海馬及大腦皮質等部位發(fā)現(xiàn)較多的陽性細胞。P53在血腫側腦組織的胞核內(nèi)廣泛表達，集中在血腫周圍紋狀體區(qū)、皮質、皮質下及海馬區(qū)等部位。2.與腦出血組比較，血腫抽吸組、細胞移植組和聯(lián)合治療組的mNSS評分、P53表達量均下降(P＜0.05)，并且7d時，聯(lián)合治療組的mNSS評分及P53表達