中間普氏菌溶血活動的研究.pdf

1、該研究通過調(diào)查溶血基因在中間普氏菌臨床分離株中的分布,尋找中間普氏菌的不同毒力株,進(jìn)一步探討溶血基因與中間普氏菌致病性的關(guān)系.該實驗包括三部分:1.PCR方法快速鑒定中間普氏菌 該研究使用16SrRNA-PCR方法從慢性成人牙周炎患者齦下菌斑中分離鑒定中間普氏菌菌株.PCR方法所用引物選自有關(guān)文獻(xiàn),陽性擴(kuò)增片段為855bp.用該PCR方法檢測57例慢性成人牙周炎患者,20例患者檢出陽性.中間普氏菌在慢性成人牙周炎患者中的檢出率為35.1

2、﹪,這一結(jié)果與文獻(xiàn)報道中間普氏菌在英國慢性成人牙周炎患者中的檢出率近似.2.中間普氏菌臨床分離株溶血活動的鑒定 用標(biāo)準(zhǔn)試管法比較中間普氏菌臨床分離株和標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25611及P.n標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33563的溶血活動,ATCC33563作為陰性對照.實驗結(jié)果證實中間普氏菌臨床分離株在對數(shù)生長期比靜止期有較強(qiáng)的溶血活性.中間普氏菌臨床分離株的溶血量隨菌液濃度增加而增加.溶血活動要求一定的溫度,37℃培養(yǎng)能得到最佳的溶血活動,4℃及80

3、℃培養(yǎng)均無可測得的溶血活動.在一定濃度范圍內(nèi),細(xì)菌的溶血量,隨底物紅細(xì)胞濃度的增加而增加但存在飽和度.中間普氏菌臨床分離株溶血活動顯示宿主細(xì)胞特異性,對兔血及人血均有相當(dāng)程度的溶血,而對羊血溶血活動較弱.將菌液與蛋白酶-K溫育1h,溶血活動明顯下降,溶血活動顯示蛋白屬性.3.溶血基因在中間普氏菌臨床分離株中的分布 根據(jù)溶血基因的三個可讀框架分別設(shè)計引物用PCR方法檢測溶血基因在中間普氏菌臨床分離株中的分布.35株分離株有5株檢測到溶血基

4、因,其中兩株檢測到ORF2基因,另外三株檢測到ORF3基因,5株均有ORF1基因.其余30株未檢測到溶血基因.DNA雜交實驗證實這30株菌沒有上述三個可讀框架,但這些菌株仍可以測得較強(qiáng)的溶血活動,這提示溶血活動不是由一個基因決定,可能存在其他決定溶血活動的基因. 結(jié)論:中間普氏菌在健康位點與疾病位點的檢出率有統(tǒng)計學(xué)差異,提示中間普氏菌與牙周疾病關(guān)系密切.溶血基因在中國慢性成人牙周炎患者中間普氏菌臨床分離株的檢出率較低.大量存在的中間普氏