CR16在睪丸組織中的表達(dá)及其與無精子癥發(fā)病相關(guān)性的初步探討.pdf

1、目的：檢測糖皮質(zhì)激素區(qū)域表達(dá)基因16 (Corticosteroids and regional expression 16，CR16)在正常SD大鼠睪丸組織中的表達(dá)，為后續(xù)研究CR16在人類生殖系統(tǒng)的表達(dá)提供前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及方法學(xué)準(zhǔn)備。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測CR16蛋白在5只正常SD大鼠睪丸組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：CR16蛋白表達(dá)于大鼠睪丸生精小管上皮，主要分布在支持細(xì)胞、支持細(xì)胞與生精細(xì)胞連接區(qū)(

2、Sertoli cell-spermatid junctions，SspJs)。
　　 結(jié)論：CR16在大鼠睪丸組織中定位于支持細(xì)胞及SspJs，提示CR16可能參與精子發(fā)生過程。
　　 實(shí)驗(yàn)二 CR16在無精子癥患者及正常男性睪丸組織中的定位及定量表達(dá)
　　 目的：研究CR16在非梗阻性無精子癥患者、梗阻性無精子癥患者及正常男性睪丸組織中的定位及定量表達(dá)，探討CR16與無精子癥發(fā)病的相關(guān)性。
　　 方法

3、：采用免疫組織化學(xué)法和逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcript polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測CR16蛋白和CR16 mRNA在6例非梗阻性無精子癥患者、23例梗阻性無精子癥患者和6例正常男性睪丸組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：CR16蛋白表達(dá)于睪丸生精小管上皮，主要分布在支持細(xì)胞胞漿、胞膜及SspJs，非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16蛋白的表達(dá)明顯弱于梗阻性無精癥

4、患者及正常男性。非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16 mRNA的表達(dá)（0.640±0.021）顯著弱于正常男性（0.952±0.036）（P<0.01），梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16 mRNA的表達(dá)（0.953±0.036）與正常男性睪丸組織中CR16 mRNA的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中CR16表達(dá)水平顯著降低，提示CR16可能與非梗阻性無精子癥的發(fā)病有著相關(guān)性

5、，可能參與精子發(fā)生障礙。
　　 實(shí)驗(yàn)三 CR16在無精子癥發(fā)病機(jī)制中的初步探討
　　 目的：研究神經(jīng)型威奧綜合征蛋白(neural Wiscott-Aldrich syndrome protein，N-WASP）在非梗阻性無精子癥患者及正常男性睪丸組織中的定位及定量表達(dá)，探討CR16與N-WASP在人睪丸組織中的相關(guān)性及其在精子發(fā)生中的作用。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR法檢測N-WASP mRN

6、A在6例非梗阻性無精子癥患者和6例正常男性睪丸組織中的定位及定量表達(dá)；用免疫熒光雙標(biāo)記法及激光掃描共聚焦顯微鏡（laser scanning confocal microscopy，LSCM）觀察CR16與N-WASP在非梗阻性無精子癥患者和正常男性睪丸組織中的共表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：N-WASP蛋白表達(dá)于睪丸生精小管上皮，主要分布在支持細(xì)胞胞漿、胞膜及SspJs，非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中N-WASP蛋白的表達(dá)明顯弱于正

7、常男性。非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中N-WASP mRNA的表達(dá)（0.645±0.025）顯著弱于正常男性（0.960±0.031）（P<0.01）。CR16 mRNA與N-WASP mRNA在非梗阻性無精子癥患者睪丸組織中的相對表達(dá)量約為1：1，二者在正常男性睪丸組織中的mRNA相對表達(dá)量也約為1：1。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示，CR16與N-WASP在睪丸SspJs處的表達(dá)相疊加，說明二者是以復(fù)合物的形式存在于人類睪丸組織中。