再灌注期間應用槲皮素對離體大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用及機制研究.pdf

1、目的：缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury, I/R)是指在一定條件下，當組織、器官血供不足后重新獲得血液供應時，不但沒有使組織細胞原有的缺血損害減輕或恢復，反而產(chǎn)生了新?lián)p傷的現(xiàn)象[1】。它是體內損傷修復過程中，病情反復及加重的重要病理機制，其發(fā)生機制包括氧自由基生成增多、細胞內鈣超載、急性炎癥反應和血管內皮細胞自穩(wěn)態(tài)破壞等等。人們現(xiàn)已證實在心、腦、腎、胃、腸道等多種組織和器官中都存在缺血再灌注損傷的現(xiàn)

2、象。心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemiareperfusion injury, MIRI)是臨床上廣泛關注的問題，常見于許多臨床過程中，如心臟手術、冠脈搭橋、臟器血供梗塞后再通、器官移植以及休克臟器低灌流糾正后都可能發(fā)生再灌注損傷。目前，心肌缺血再灌注損傷(MIRI)成為缺血心肌從再灌注療法中獲得最佳療效的主要難題。因此，盡量縮短缺血發(fā)作與冠脈再通的同時，尋找有效的防治藥物，最大程度地改善再灌注心肌的代謝狀態(tài)，在某

3、種程度上對減輕再灌注損傷有著重要的意義。故探索具有良好保護作用的藥物顯得尤為重要。
　　 槲皮素(quercetin，3，3’，4’，5，7-五羥基黃酮，Que)是廣泛存在于多種天然植物中的一種黃酮類化合物，毒副作用小，藥理作用多樣，具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、擴張動脈、抑制血小板聚集和改善循環(huán)等多種生物活性。Que的心血管保護作用的機制可能涉及舒張血管降低血壓、減輕心肌肥厚、抑制血管平滑肌增殖、保護和維持血管內皮完整，從而

4、顯著促進缺血后心臟功能的恢復，具有良好的心肌保護作用[5]。但Que對于心肌的缺血/再灌注保護作用的確切機制尚未見報道。
　　 近年來國外將Que試用于多種疾病的治療，均取得了良好的治療效果。但對心血管疾病的治療還未見報道。因此，為了深入認識槲皮素在體內的生物學作用，本研究利用大鼠離體心臟的缺血再灌注模型，觀察再灌注期間給予Que對心臟血流動力學、生化指標以及心肌超微結構等改變，來探討Que對心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其可能

5、的機制。我們希望尋找一種新的保護心肌缺血再灌注損傷的方式，為治療心肌缺血性疾病開辟一條新途徑。
　　 方法：48只雄性SD大鼠被隨機分配為四組（n=6）：缺血再灌注組（I/R組）、Que（10、100、200μrnol/L）組。大鼠麻醉成功后固定于操作臺上，迅速開胸，取出心臟，用Langendorff離體心臟灌流技術制備心臟缺血再灌注損傷模型。從再灌注開始經(jīng)側管分別給予的Que(10、100、200μmol/L)組灌流液，建立不

6、同藥物濃度的干預組。各組處理方案如下：
　　 I/R組：平衡灌注20min，缺血30min，用K-H液再灌注，持續(xù)灌流60min。
　　 10μmol/LQue組：再灌注開始給予10μmol/L的Que灌流液，持續(xù)灌流60min。
　　 100μmol/LQue組：再灌注開始給予100μmol/L的Que灌流液，持續(xù)灌流60min。
　　 200μmol/LQue組：再灌注開始給予200μmol/L的Qu

7、e灌流液，持續(xù)灌流60min。
　　 實驗過程中，觀察離體大鼠心臟基礎狀態(tài)和缺血再灌注狀態(tài)下心臟功能指標的變化和冠脈流量。心功能參數(shù)包括心率(heart rate，HR)、左心室收縮壓(left ventricular systolic pressure，LVSP)、左室舒張末期壓(leftventricular end diastolic pressure, LVEDP)、左心室發(fā)展壓(left ventriculardeve

8、lop pressure，LVDP)和左室內壓最大變化速率(maximal positive andnegative velocity of left ventrichlar pressure，±Dp/dtmax)、冠脈灌流量（coronary perfusion flow，CF）。此外，留取各監(jiān)測時間點心臟漏出液，測定其中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)活性。實驗結束后，取心肌組織檢測超氧化物岐化酶(s

9、uperoxide dismudase，SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量，以及Bcl-2、Bax蛋白測定，并利用透射電鏡技術觀察各處理組心肌超微結構變化。
　　 結果：
　　 1 Que對缺血再灌注心功能的影響
　　 1.1LVDP:復灌60min末，與I/R組相比，Que（10、100、200μmol/L）組可濃度依賴性地使LVDP明顯升高(由I/R組的7.32士0.63mm

10、Hg分別升高至13.38士2.16、20.21±2.64、24.13士2.29mmHg)(P＜0.05)。
　　 1.2+Dp/dtn,ax:復灌60min末，與I/R組相比，Que（10、100、200μmol/L）組可濃度依賴性地使+dp/dtmax恢復率明顯升高(由I/R組的18.14％±1.21％分別升高至19.70％±0.75％、22.55％士0.54％、28.26％士0.60％)(P＜0.05)。
　　 1.

11、3-Dp/dtmax:復灌60min末，與I/R組相比，Que(10、100、200μmol/L)組可濃度依賴性地使-dp/dtmax恢復率明顯升高(由I/R組的23.68％±1.50％分別升高至26.76％士0.92％、30.09％±1.27％、33.44％±2.28％)(P＜0，05)。
　　 1.4HR:復灌60min末，各組之間HR無顯著性差異(P＞0.05)。I/R組與Que（10、100、200μmol/L）組的HR

12、分別為198.17士12.01、196.67士12.58、205.33士12.09、199.17士7.19。
　　 1.5CF:復灌60min末，與I/R組相比，Que（10、100、200μmol/L）組可濃度依賴性地使CF明顯升高（由I/R組的3.58士0.55分別升高至4.60±0.91、5.45士0.56、6.40土0.78）（P＜0.05）。
　　 2 LDH活性改變：復灌60min末，與I/R組相比，Que(

13、10、100、200μmol/L)組可濃度依賴性地使LDH值明顯降低(由I/R組的109.55±2.52分別降至70.69±8.48,51.15±6.65,40.98±9.27)(P＜0.05)。
　　 3 心肌組織SOD活力和MDA含量的變化：與I/R組相比，Que(10、100、200μmol/L)組SOD活性明顯升高(P＜0.05)，MDA含量明顯減少（P＜0.05）。
　　 4 Que劑量組對缺血再灌注心臟的心肌

14、組織Bcl-2和Bax蛋白表達的影響：與I/R組相比，Que（10、100、200μmol/L）組Bcl-2蛋白表達明顯升高(P＜0.05)，Bax蛋白表達明顯減少（P＜0.05）。
　　 5 Que對大鼠心肌缺血再灌注損傷的病理形態(tài)的影響：透射電鏡觀察顯示：I/R組細胞核明顯水腫，線粒體大部分嵴和膜融合，模糊不清，糖原數(shù)量明顯減少，肌節(jié)排列紊亂或消失。Que（10、100、200μmol/L）組可使細胞核水腫程度減輕，肌節(jié)排列