ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后.pdf

1、目的：ID蛋白是調(diào)控細(xì)胞增殖和分化的重要的調(diào)節(jié)因子。本研究檢測了ID蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)譜并分析了其與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系，進(jìn)一步研究了其細(xì)胞生物學(xué)水平的變化及相應(yīng)的機(jī)制。
　　方法：選取復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院從2001年8月至2006年3月250例患者乳腺癌樣本，通過組織芯片檢測了ID蛋白的表達(dá)情況和在乳腺癌預(yù)后中所起的作用;然后，通過三維培養(yǎng)，RNA測序及生物信息學(xué)分析調(diào)查并闡述了可能存在的分子機(jī)理;通過免疫熒光，點(diǎn)突變，雙熒光

2、報(bào)告等試驗(yàn)對(duì)發(fā)現(xiàn)的機(jī)制進(jìn)行了研究。
　　結(jié)果：免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)ID1，ID2和ID3在乳腺癌組織和正常乳腺組織中都有表達(dá)，其中ID2在乳腺癌中表達(dá)明顯高于正常乳腺組織。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)ID2和ID3在ER受體陽性的乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)較高，且卡方檢驗(yàn)ID2和ID3的表達(dá)與ER受體的狀態(tài)有相關(guān)性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值分別為0.016和0.006。通過Kaplan-meier和Cox回歸模型分析發(fā)現(xiàn)ID2的表達(dá)水平是乳腺癌的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子(

3、P=0.013;HR=2.358，95％CI1.065-5.218)。在乳腺癌分型后，ID2的預(yù)后價(jià)值在三陰性乳腺癌中最有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。在三維培養(yǎng)中，我們發(fā)現(xiàn)在乳腺良性細(xì)胞系中過表達(dá)ID蛋白可以抑制細(xì)胞的正常分化，出現(xiàn)過度增殖，癌變表型。將出現(xiàn)表型的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系和對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行RNA測序，然后對(duì)測序獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其中多條通路都發(fā)生了變化。我們選取比較感興趣的一條上皮黏附連接的重構(gòu)通路進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)該通路中的

4、關(guān)鍵蛋白E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)。通過克隆E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)序列并構(gòu)建雙熒光報(bào)告質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)在這種野生型報(bào)告質(zhì)粒中ID蛋白可以顯著抑制E-cadherin啟動(dòng)子的活性;然后對(duì)該野生型質(zhì)粒序列中的ID蛋白作用元件E-box都做點(diǎn)突變，發(fā)現(xiàn)ID蛋白主要通過間接抑制轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-1286至-1281位的E-box活性發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的。應(yīng)用組織芯片重新檢測E-cadherin的表達(dá)情況，我們發(fā)現(xiàn)ID2與其表達(dá)成負(fù)相關(guān)(P=

5、0.020，Pearson's R=-0.155).結(jié)合ID2和E-cadherin的表達(dá)，病人被分作四個(gè)亞組，亞組之間無病生存率存在差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023)。
　　結(jié)論：ID蛋白在乳腺癌中都有高表達(dá)，其中ID2可以提示乳腺癌差的預(yù)后。這一現(xiàn)象存在的分子生物學(xué)過程是，ID蛋白可以抑制乳腺良性上皮細(xì)胞的正常分化過程，促使上皮細(xì)胞的過度增殖和癌變。這一過程中涉及許多分子信號(hào)通路的變化，其中一條就是上皮黏附連接的重構(gòu)通路。I