誘導幼羔卵泡發(fā)育及體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)研究.pdf

1、本文研究了運輸應(yīng)激、重復激素處理對誘導羔羊卵泡發(fā)育(簡稱“幼羔超排”)效果的影響，比較了幼羔超排后所采集卵母細胞與從屠宰場所獲成年羊卵巢卵母細胞的體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育能力，并研究了精液處理方法以及在發(fā)育液中添加EDTA對幼羔卵母細胞體外受精及早期胚胎發(fā)育能力的影響，此外還開展了玻璃化冷凍保存幼羔卵母細胞技術(shù)研究，結(jié)果如下: 運輸應(yīng)激組與對照組只均獲卵數(shù)(39.3±21.2vs 41.2±20.8枚)、只均獲可用卵數(shù)(

2、39.0±189 vs 38.4±17.3枚)和只均獲可用卵率(98.1％vs 93.3％)均無顯著性差異(P>0.05)。重復激素處理組只均獲卵數(shù)、只均獲可用卵數(shù)(15.0±8.8和14.24±6.3枚)均極顯著性低于第一次激素處理組(40.34±10.8和38.7±9.7枚)(P<0.01)，但兩組只均獲可用卵率無顯著性差異(P>0.05)。 羔山羊卵母細胞體外成熟率(70.1％)顯著性低于從屠宰場所獲成年羊卵巢卵母細胞(9

3、0.7％)(P<0.05)。羔山羊卵母細胞體外受精后的卵裂率和桑椹胚率(59.0％和17.4％)都極顯著性低于成年山羊卵巢卵母細胞(82.4％和46.4％)(P<0.01)。羔綿羊卵母細胞利用新鮮精液進行體外受精(IVF)48 h的卵裂率(51.03％)顯著性高于新鮮精液低溫保存組(42.02％)和精液冷凍保存組(46.30％)(P<0.05)，精液低溫保存組(42.02％)和冷凍保存組(46.30％)間卵裂率無顯著性差異(P>0.05

4、)。在受精液和胚胎發(fā)育液中分別添加10μnol EDTA，IVF 48 h的卵裂率(59.0％)與對照組(50.8％)無顯著差異(P>0.05)，但IVF 120 h發(fā)育至16細胞以上胚胎的比例(100％)極顯著高于對照組(46.9％)(P<0.01)。幼羔超排所生產(chǎn)體外胚胎進行胚胎移植的產(chǎn)羔率為12.5％，產(chǎn)下3只健康羔羊。 利用含有2.5％DMSO+27.5％EG的玻璃化液(2液)，采用OPS法冷凍保存羔山羊超排卵母細胞解凍