扇貝裙邊糖胺聚糖對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)SH-SY57細(xì)胞氧化應(yīng)激與凋亡的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究扇貝裙邊糖胺聚糖(SS-GAG)對(duì)6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導(dǎo)的人神經(jīng)母瘤細(xì)胞株SH-SY5Y丙二醛(MDA)含量、乳酸脫氫酶(LDH)活性、早期凋亡率以及凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2與蛋白Cyt C、Caspase-9表達(dá)的影響，探討SS-GAG保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元的作用機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，隨機(jī)分為對(duì)照組、6-OHDA損傷組和6-OHDA+SS-GAG(200、400和800μg/ml)

2、處理組。測定細(xì)胞中MDA含量和LDH活性，AnnexinⅤ-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡，實(shí)時(shí)熒光(real-time) PCR檢測細(xì)胞Bcl-2、Bax mRNA表達(dá)的變化，蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)檢測胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞色素C(CytC)的蛋白釋放量，流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測活化Cappase-9蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相比，6-OHDA損傷組的MDA含量增加，LDH活性增高，早期凋亡率

3、升高，Bcl-2 mRNA表達(dá)降低，Bax mRNA表達(dá)升高，胞質(zhì)內(nèi)Cyt C釋放量增多，表達(dá)活化Caspase-9蛋白的細(xì)胞數(shù)增加，各項(xiàng)指標(biāo)均存在顯著差異(P＜0.01)，損傷效果明顯。加入SS-GAG后，與6-OHDA損傷組比較，SH-SY5Y細(xì)胞中MDA含量減少，LDH活性降低，細(xì)胞早期凋亡率降低，Bcl-2 mRNA表達(dá)升高，Bax mRNA表達(dá)降低，胞質(zhì)內(nèi)Cyt C蛋白含量減少，活化的Caspase-9蛋白表達(dá)量減少。