esRAGE基因修飾OECs移植對糖尿病缺血性足部潰瘍的治療研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:
  1、觀察正??瞻讓φ战M、單純糖尿病組、糖尿病缺血性足部潰瘍組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射未轉(zhuǎn)染OECs組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射轉(zhuǎn)染后OECs組、糖尿病缺血性足部潰瘍注射DMEM培養(yǎng)液組6組大鼠肌肉組織RAGE、NF-kB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白的表達水平。
  2、探討esRAGE基因轉(zhuǎn)染OECs進行細胞移植的同時提高局部esRAGE水平對糖尿病缺血性足部潰瘍的治療作用。
  方法:<

2、br>  SD雄性大鼠60只,體重260-300g,隨機分為6組:正??瞻讓φ战M(N組)10只,單純糖尿病組(DM組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍組(DFU組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍注射未轉(zhuǎn)染OECs組(DFU+OECs組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍注射轉(zhuǎn)染后OECs組(DFU+esRAGE+OECs組)10只;糖尿病缺血性足部潰瘍注射DMEM培養(yǎng)液組(DFU+DMEM組)10只。實驗組大鼠給予1%鏈脲佐菌素(50毫克/公斤)腹

3、腔注射,對照組予以等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射??崭寡?FBG)≥16.7 mmol/L視為糖尿病造模成功。一周后,每只大鼠以10%水合氯醛按3.0 m/k g腹腔注射麻醉,沿左側(cè)腹股溝中點至膝內(nèi)側(cè)作約1.5cm長的切口,分離出股動脈及其分支并結(jié)扎,同時結(jié)扎腘動脈。DFU+OECs組、DFU+esRAGE+OECs組分別進行細胞移植,DFU+DMEM組用相同方法注射DMEM培養(yǎng)液作對照。沿股動脈至腘動脈走向于內(nèi)收肌至腓腸肌選取

4、6個點,每隔2mm用麻醉針頭肌肉注射移植液體50uL,共0.3mL(細胞總數(shù)5×105個)。DFU+OECs組注射未轉(zhuǎn)染OECs,DFU+esRAGE+OECs組注射轉(zhuǎn)染后OECs,DFU+DMEM組注射DMEM培養(yǎng)液。細胞移植完畢后用剪刀在左側(cè)下肢足部背側(cè)造成穿透全層皮膚的傷口,剪下5mm×5mm面積的皮膚。移植后大鼠在同等條件下飼養(yǎng)4周,同時觀察傷口愈合情況。于第4周末頸椎脫臼處死大鼠,取細胞移植處肌肉組織,采用HE染色檢測毛細血管

5、分布密度及內(nèi)皮細胞增生情況。通過使用TUNEL方法檢測細胞凋亡的表達。采用熒光定量PCR和免疫組化檢測組織RAGE、NF-κB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白表達水平。
  結(jié)果:
  與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中 NF-κB表達強度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織NF-κB表達減少,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs

6、+esRAGE組大鼠NF-κB表達量減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
  與 DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中 RAGE表達強度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織RAGE表達減少,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比, DFU+OECs+esRAGE組大鼠RAGE表達量減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
  與DFU組、DFU+DMEM組大

7、鼠肌肉組織中TGF-β1表達強度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織TGF-β1表達增加,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠TGF-β1表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
  與DFU組、DFU+DMEM組、DFU+OECs組三組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠VEGF蛋白表達量稍有增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<

8、0.01)。
  與DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中細胞凋亡量比較,DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織凋亡減少,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);DFU組、DFU+DMEM組大鼠肌肉組織中細胞凋亡量較正常對照組及DM組大鼠增多(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠細胞凋亡量減少且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);
  與DFU組、DFU+DM

9、EM組大鼠肌肉組織中RAGEmRNA表達強度比較, DFU+OECs組、DFU+OECs+esRAGE組大鼠肌肉組織RAGEmRNA表達增強,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與DFU+OECs組相比,DFU+OECs+esRAGE組大鼠RAGEmRNA表達量降低,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
  結(jié)論:
  1、esRAGE基因修飾的OECs移植大鼠肌肉組織RAGE、NF-kB蛋白的表達和RAGEmRNA含量水平

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