茄子小孢子熱激信號的表達(dá)和離體發(fā)育研究.pdf

1、游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)，由于其潛在的應(yīng)用前景受到越來越多學(xué)者的廣泛關(guān)注。在茄科作物中，煙草的小孢子培養(yǎng)系統(tǒng)已發(fā)展的比較完善，但其他茄科蔬菜作物(茄子、番茄、辣椒)的小孢子培養(yǎng)誘導(dǎo)率低，且很難誘導(dǎo)成株。試驗以Z1、Z3、Z53個茄子二倍體栽培品種為供試材料，在課題組原有研究的基礎(chǔ)上，對熱激信號的表達(dá)和小孢子的離體形態(tài)發(fā)生進行了研究，進一步研究茄子離體小孢子形態(tài)發(fā)生的機理。試驗結(jié)果如下： 1.對36℃熱激0d、2d、4d、6d、8d的小

2、孢子進行觀察，結(jié)果表明熱激6d時小孢子的膨大率及成活率最高。 2.對36℃熱激0d、2d、4d、6d、8d的有活力和無活力小孢子的大小進行檢測，結(jié)果表明了其二態(tài)性現(xiàn)象。二態(tài)性現(xiàn)象的存在，充分解釋了對于從新鮮或處理后的花藥中游離的小孢子進行純化去除衰敗小孢子的必要性。 3.將36℃熱激處理6d的小孢子進行離體培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)中膨大的小孢子成活率高，且發(fā)生細(xì)胞分裂，不膨大的小孢子逐漸死亡。再次證明了誘導(dǎo)小孢子離體形態(tài)發(fā)生有

3、必要游離純化膨大的小孢子，去除衰敗小孢子的負(fù)面影響。 4.高溫?zé)峒な歉淖冃℃咦影l(fā)育途徑的重要條件。經(jīng)熱激預(yù)處理的小孢子培養(yǎng)后獲得了愈傷組織，未經(jīng)熱激處理的小孢子沒有發(fā)生分化，有些在培養(yǎng)過程中有花粉管的形成。不同基因型材料間愈傷組織的發(fā)生率和花粉管的萌發(fā)率均不同，Z5>Z3>Z1。 5.半定量RT-PCR檢測結(jié)果表明，36℃熱激6d后3個品種熱激蛋白HSP70mRNA的表達(dá)量都高于未熱激之前，不同基因型的品種之間存在差異，

4、Z1經(jīng)熱激6d后表達(dá)量最多，其次是Z5，Z3表達(dá)量最少。與小孢子離體誘導(dǎo)形態(tài)發(fā)生(Z5>Z3>Z1)的研究對比，HSP70mRNA的表達(dá)量與小孢子離體誘導(dǎo)形態(tài)發(fā)生的潛能不成正比，HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)并不表明HSP70蛋白質(zhì)的翻譯表達(dá)，也就是說mRNA水平上的增加并不代表蛋白水平上的增加。 6.小孢子培養(yǎng)再生植株自然加倍率達(dá)50％。單倍體、二倍體、四倍體3種倍性材料在葉、花、氣孔等性狀指標(biāo)上存在極顯著差異。而在株高和株幅上