利用RNAi及轉(zhuǎn)基因技術(shù)抑制BmNPV增殖的研究.pdf

1、RNAi，又稱RNA干預(yù)或者RNA干涉，是dsRNA介導(dǎo)的特異性基因表達(dá)沉默現(xiàn)象。為了利用RNAi技術(shù)提高家蠶對(duì)核型多角體病毒(BmNPV)的抗性，根據(jù)BmNPV復(fù)制必需基因．ie-1、lef-1設(shè)計(jì)其相應(yīng)的dsRNA(21 bp)，構(gòu)建了帶有je-1 daRNA表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因載體piggyantiIE-neo和同時(shí)帶有je-1 dsRNA表達(dá)盒、lef-1 dsRNA表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因載體piggyantiIE-lef1—neo。研究結(jié)果

2、顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)化piggyantiIE--neo BmN細(xì)胞，對(duì)BmNPV的增殖表現(xiàn)出抑制作用，穩(wěn)定轉(zhuǎn)化piggyantiIE-lef1-neo細(xì)胞對(duì)BmNPV增殖的抑制效果優(yōu)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)化piggyantiIE-neo細(xì)胞，但在病毒感染后期，均由于病毒恢復(fù)增殖導(dǎo)致RNAi的效果被掩蓋。通過反向PCR分析了外源DNA片段插入基因組位點(diǎn)，結(jié)果顯示：在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中，外源DNA可通過隨機(jī)整合或按照piggyBac特定的轉(zhuǎn)座位點(diǎn)TTAA插入細(xì)胞基因組。