野豬家豬AMPD1基因的克隆、表達(dá)和遺傳變異的研究.pdf

1、腺苷一磷酸脫氨酶(AMPD)是僅在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一種酶，是嘌呤代謝中的關(guān)鍵酶之一，它的作用是催化AMP(一磷酸腺苷)脫氨生成IMP(肌苷酸)。AMPD基因由多基因家族編碼，家族成員有AMPD1、AMPD2、AMPD3。AMPD1基因在所有的真核生物中都存在，但主要在骨骼肌中高水平表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)AMPD1基因與NGFB基因緊密連鎖，因NGFB基因定位區(qū)域與肉質(zhì)胴體性狀(如胴體重、肩肉重、肌肉重、肌肉面積等)有關(guān)，所以也將AMPD1基因

2、作為胴體性狀的候選基因來(lái)研究。本研究以人、鼠的AMPD1基因序列為基礎(chǔ)，首次克隆了野豬和家豬AMPD1基因的cDNA序列：并且以野豬、民豬、大白、長(zhǎng)白、杜洛克為研究對(duì)象，利用PCR-SSCP方法檢測(cè)它們的多態(tài)性，探討不同基因型在不同品種(系)間的分布規(guī)律；采用半定量RT-PCR方法研究了這個(gè)基因在不同組織及相同組織不同生長(zhǎng)時(shí)期的表達(dá)特性。主要研究結(jié)果如下： 1.采用同源克隆首次克隆了家豬和野豬AMPD1基因的cDNA序列，豬AM

3、PD1基因編碼區(qū)全長(zhǎng)2244bp，編碼747個(gè)氨基酸：野豬AMPD1基因cDNA全長(zhǎng)2240bp，開(kāi)放閱讀框位于399～2240bp，編碼613個(gè)氨基酸。采用生物信息學(xué)方法對(duì)其編碼的多肽鏈進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和功能域的初步分析。 2.采用PCR-SSCP方法在AMPD1基因編碼區(qū)上共尋找到11個(gè)單核苷酸突變，其中有4個(gè)突變屬于錯(cuò)義突變。群體遺傳學(xué)分析表明，所檢測(cè)的4個(gè)位點(diǎn)中，5個(gè)品種間基因型的分布均存在著極顯著的差異(P＜0.01)；野豬

4、和民豬之間除了S5位點(diǎn)基因型的分布存在顯著差異外(0.01＜P＜0.05)，其他3個(gè)位點(diǎn)上基因型分布差異均不顯著(P＞0.05)。 3.半定量RF-PCR方法檢測(cè)了野豬和純種大白豬AMPD1基因在心、肝、胃、腎、脾、肺、肌肉、大腸、小腸、性腺共10種組織表達(dá)情況，結(jié)果表明豬的AMPD1基因僅在其肌肉組織中表達(dá)；同時(shí)檢測(cè)了AMPD1基因肌肉組織不同生長(zhǎng)時(shí)期的表達(dá)特性，結(jié)果顯示AMPD1基因在1日齡大白豬肌肉組織中表達(dá)量最高，其次是