胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、 本研究嘗試通過胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng)，熟悉研究胚胎干細(xì)胞的技術(shù)路線，對(duì)分離出的胚胎干細(xì)胞進(jìn)行體外分化抑制培養(yǎng)并對(duì)其加以鑒定；初步掌握人胚胎干細(xì)胞分離、建系的技術(shù)和方法，探索有效誘導(dǎo)人胚胎生殖細(xì)胞為神經(jīng)細(xì)胞的途徑，為相關(guān)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法：1.分別以昆明小鼠和人流產(chǎn)胚胎生殖嵴為材料分離內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和原始生殖細(xì)胞，進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)及凍存復(fù)蘇，觀察其生物學(xué)特性；分析了胰蛋自酶和絲裂霉素C的濃度和作用時(shí)間對(duì)ICM和PGC離散

2、效果的影響。2.采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的胚胎階段特異性抗原SSEA-1、SSEA-4和堿性磷酸酶的表達(dá)；對(duì)體外分離培養(yǎng)的hEGCs進(jìn)行了染色體核型分析和體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn)。3.比較了小鼠和人胎兒成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層分離、培養(yǎng)人原始生殖細(xì)胞的效果。4.以維甲酸(RA)為誘導(dǎo)劑，對(duì)傳代培養(yǎng)的人胚胎生殖細(xì)胞(hEGCs)進(jìn)行分化誘導(dǎo)，使用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)后的細(xì)胞NESTIN、NSE、NF-200和GFAP的表達(dá)。 研究表