香桂化濁膠囊的數(shù)字化指紋圖譜研究及其質(zhì)量控制.pdf

1、香桂化濁膠囊是在河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院臨床應(yīng)用多年的經(jīng)驗方基礎(chǔ)上開發(fā)研制的制劑，由肉桂、土大黃、廣藿香組成。具有清化濕濁、芳香醒脾之功效。主治因各種疾病后脾胃內(nèi)傷、邪留未盡所致長期納呆、腹脹腸鳴、大便溏泄、或帶有粘液、或有低熱。主要用于證屬脾虛濕困的慢性腸炎、真菌性腸炎的治療。國內(nèi)已有學(xué)者對其制劑工藝、質(zhì)量控制及毒理學(xué)進(jìn)行了研究報道。本課題在總結(jié)其研究工作的基礎(chǔ)上，對香桂化濁膠囊的化學(xué)組成、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及其含量測定進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，從而

2、期望實現(xiàn)對其有效、科學(xué)的質(zhì)量控制。
　　本課題結(jié)合高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)、薄層鑒別(TLC)、薄層掃描等方法對香桂化濁膠囊進(jìn)行了研究，在此基礎(chǔ)上建立了香桂化濁膠囊的指紋圖譜，香桂化濁膠囊揮發(fā)油的指紋圖譜，香桂化濁膠囊3種主要成分的薄層鑒別及薄層掃描定量。
　　本實驗結(jié)合了天然藥物化學(xué)、分析化學(xué)、藥劑學(xué)等的方法和手段，研究了香桂化濁膠囊的化學(xué)成分、質(zhì)量評價及控制標(biāo)準(zhǔn)，為中藥膠囊做有意義

3、的探索。
　　第一部分:香桂化濁膠囊的HPLC指紋圖譜研究
　　目的:建立香桂化濁膠囊的HPLC指紋圖譜，得到對照指紋圖譜，并與不同批次香桂化濁膠囊的指紋特征進(jìn)行比較，計算其相似度。
　　方法:
　　1.提取條件的優(yōu)化:比較了不同提取方法、不同提取溶劑、不同提取時間所提取的效果，選擇提取成分多、提取率高的提取條件。
　　2.色譜條件的優(yōu)化:考察了不同的流動相、波長、柱溫等影響因素，從而確定了最佳的色譜條件。

4、
　　3.系統(tǒng)適用性試驗:在確定的色譜條件下，考察指紋圖譜中肉桂醛色譜峰的分離度和理論塔板數(shù)。
　　4.方法學(xué)考察:分別對精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行了考察。
　　5.指紋圖譜的建立:共取了8批香桂化濁膠囊制備樣品溶液，進(jìn)行指紋圖譜分析，評價其相似度。
　　結(jié)果:
　　1.樣品的處理方法:75％乙醇加熱回流提取30 min，提取效率高，重復(fù)性好。
　　2.色譜柱為DiamonsilTM C18柱(250

5、 mm×4.6 mm，5μm)，柱溫為30℃，檢測波長280 nm，流動相為甲醇-乙腈-0.1％乙酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0mL·min-1，進(jìn)樣量20μL。
　　3.系統(tǒng)適用性試驗:肉桂醛色譜峰的理論塔板數(shù)約為8000，與其他色譜峰的分離度大于1.5。
　　4.方法學(xué)考察:精密度試驗:計算各主要色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別小于0.48％和1.01％，說明精密度良好。重復(fù)性試驗:計算各主要色譜峰的相對保

6、留時間和相對峰面積的RSD分別小于0.89％和2.58％，說明重復(fù)性良好。穩(wěn)定性試驗:計算各主要色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別小于0.76％和2.33％，說明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　5.指紋圖譜的建立及數(shù)據(jù)分析:首先得到8批香桂化濁膠囊的指紋圖譜及其18個共有峰，運用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版軟件計算，8批香桂化濁膠囊的相似度均在0.9以上，批間差異較小。
　　結(jié)論:建立了香桂化濁膠囊

7、的HPLC指紋圖譜的分析方法，并利用相對保留值和中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件對不同批次的香桂化濁膠囊指紋圖譜的分析結(jié)果進(jìn)行了評價。本方法方便、準(zhǔn)確，可為香桂化濁膠囊的質(zhì)量控制提供新的依據(jù)。
　　第二部分:香桂化濁膠囊3種主要成分的HPLC同時測定
　　目的:對香桂化濁膠囊中3種主要成分（肉桂醛、廣藿香酮和大黃素）進(jìn)行含量測定，為科學(xué)有效的評價與控制香桂化濁膠囊的質(zhì)量提供新方法。
　　方法:
　　1.提取條件

8、的優(yōu)化:比較了不同提取方法、提取溶劑及提取時間對香桂化濁膠囊有效成分的提取效率，選擇重復(fù)性好，提取效率較高的提取方法。
　　2.色譜條件的優(yōu)化:考察了不同的流動相、波長、柱溫等影響因素，確定了最佳的色譜條件。
　　3.系統(tǒng)適用性試驗:在確定的色譜條件下，考察肉桂醛色譜峰的分離度和理論塔板數(shù)。
　　4.方法學(xué)考察:分別對肉桂醛、廣藿香酮、大黃素進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率的考察。
　　5.樣

9、品測定:在確定的色譜條件下，測定10批香桂化濁膠囊中3種主要成分的含量。
　　結(jié)果:
　　1.樣品處理方法:75％乙醇加熱回流提取30 min，可使有效成分在相同的色譜條件下達(dá)到最大的提取效率，且重復(fù)性好，提取方法穩(wěn)定。
　　2.色譜柱為DiamonsilTM C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱溫為30℃，檢測波長280 nm，流動相為甲醇-乙腈-0.1％乙酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL·min

10、-1，進(jìn)樣量20μL。
　　3.系統(tǒng)適用性試驗:肉桂醛的理論塔板數(shù)約為8000，與其他色譜峰的分離度大于1.5。
　　4.方法學(xué)考察:3種主要成分的線性關(guān)系均良好(r＞0.999)，線性范圍分別為:2.0～32.0，1.68～26.88，0.98～15.68μg/mL，日內(nèi)和日間精密度的RSD分別在0.61％～1.17％和0.63％～1.35％之間，回收率范圍在98.80％～99.57％之間，樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
　

11、　5.樣品測定:10批香桂化濁膠囊中3種主要成分的含量約為24 mg/g、11 mg/g和0.4 mg/g。
　　結(jié)論:采用HPLC法建立了香桂化濁膠囊3中主要成分（肉桂醛、廣藿香酮和大黃素）同時測定的方法，其專屬性強(qiáng)，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和回收率良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為保證香桂化濁膠囊的質(zhì)量提供了新的質(zhì)量控制方法。
　　第三部分:香桂化濁膠囊揮發(fā)油的GC-MS指紋圖譜研究
　　目的:建立香桂化濁膠囊揮發(fā)油的GC-MS

12、指紋圖譜，并利用MS分析香桂化濁膠囊揮發(fā)油的化學(xué)成分，為科學(xué)評價和有效控制香桂化濁膠囊的質(zhì)量提供新的方法。
　　方法:
　　1.氣相色譜條件為:彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm，0.25μm);載氣為高純度氦氣，體積流量:1.0 mL·min-1，分流比50∶1;進(jìn)樣口溫度:230℃;程序升溫:起始溫度100℃，保持2 min，以3℃·min-1升至130℃，保持5min，再以10℃·min-1升至210℃，保

13、持5 min。進(jìn)樣量:1.0μL，溶劑延遲2 min，氣化室溫度為280℃。四級桿質(zhì)量分析器。質(zhì)譜條件為:電子轟擊(EI)離子源，電力電壓70eV;離子源溫度230℃;柱前壓65.072kpa;掃描范圍20～500 amu。
　　2.采用水蒸氣蒸餾法提取香桂化濁膠囊揮發(fā)油成分，并用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)，對揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，以毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行分析，峰面積歸一化法測定其相對含量。
　　結(jié)果:共分離出3

14、7個峰，并從中鑒定出29個化學(xué)成分，占揮發(fā)油總數(shù)的90.07％。相對含量超過5％成分有反式肉桂醛（相對含量20.77％）、環(huán)己烯（相對含量5.49％）、萘（相對含量5.34％）、甘菊藍(lán)（相對含量6.26％）、鄰甲氧基肉桂醛（相對含量8.26％）、百秋李醇（相對含量10.43％）和長葉醛(相對含量10.33％)。
　　結(jié)論:
　　1.香桂化濁膠囊揮發(fā)油的主要成分為反式肉桂醛、百秋李醇、長葉醛、甘菊藍(lán)、鄰甲氧基肉桂醛等成分。參考

15、有關(guān)文獻(xiàn)對比，順式肉桂醛，反式肉桂醛，鄰甲氧基肉桂醛，羅漢柏烯，δ-畢澄茄烯，α-蒎烯等成分主要來自肉桂，百秋李醇，α-廣藿香烯，β-廣藿香烯，丁香烯等成分主要來自廣藿香。
　　2.本實驗采用GC-MS對香桂化濁膠囊揮發(fā)性成分進(jìn)行分析研究，確定其化學(xué)組成，從單一有效成分或指標(biāo)成分的定性定量分析，轉(zhuǎn)向有效成分群體分析，更加科學(xué)、準(zhǔn)確地反映了香桂化濁膠囊的內(nèi)在品質(zhì)。本研究建立了GC-MS測定香桂化濁膠囊揮發(fā)油化學(xué)成分的方法，為質(zhì)量控制

16、和對其進(jìn)一步研究提供了科學(xué)依據(jù)。
　　第四部分:香桂化濁膠囊快速TLC鑒別與主成分薄層掃描定量
　　目的:建立應(yīng)用TLC技術(shù)快速鑒別香桂化濁膠囊的方法，并運用薄層掃描定量法測定其主要成分的含量。
　　方法:
　　1.取肉桂醛、廣藿香酮、大黃素對照品與樣品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃):乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，顯色，觀察結(jié)果。
　　2.取大黃素對照品與樣品溶液