紫丁香蘑液體發(fā)酵海藻糖的提取純化及應(yīng)用研究.pdf

1、紫丁香蘑(Lepista nuda)為傘菌目，白蘑科，香蘑屬的一種藥食皆用的野生真菌。目前，對紫丁香蘑的林地栽培獲得子實體的試驗進行了研究，而對紫丁香蘑的液體發(fā)酵及有效成分的提取研究的比較少。食藥用菌中占70％以上的游離糖和游離糖醇是由一二種糖和糖醇組成的，紫丁香蘑中主要以海藻糖為主，含量較高。海藻糖可應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品等多方面的研究。我國食用菌資源豐富，借助食用菌開發(fā)海藻糖具有獨特的優(yōu)越性。本文對液體發(fā)酵紫丁香蘑海藻糖的提取、純

2、化、鑒定以及應(yīng)用進行研究。本研究主要試驗結(jié)果如下： 1.以菌絲體干重和海藻糖的含量為測定指標，確定紫丁香蘑液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成。試驗得出，最適氮源為酵母膏，碳源為葡萄糖，最初pH值為7.0。 2.紫丁香蘑菌絲體最佳提取工藝參數(shù)研究。通過對紫丁香蘑菌絲體進行單因素和3因素3水平的正交試驗，研究提取時間、溫度、乙醇濃度對紫丁香蘑菌絲體海藻糖提取的影響。影響提取的各因素順序：溫度>乙醇濃度>提取時間。最佳提取參數(shù)最優(yōu)組合為A2

3、B1C2，即提取時間為1h，溫度為70℃，乙醇濃度30％。得到的海藻糖的含量為12.92％，蛋白含量0.62％。 3.海藻糖的純化。采用Sevag法除蛋白。Sevag法中海藻糖溶液與氯仿-正丁醇溶液的比例不同時，不但對蛋白去除率有影響，而且對海藻糖的損失程度也不同，綜合考慮，最后確定除蛋白的最佳海藻糖溶液與氯仿及正丁醇的體積比為5：1：0.25。通過測定蛋白含量，從而選擇了除蛋白的次數(shù)為二次，經(jīng)二次除蛋白后的海藻糖溶液中的蛋白含

4、量為0.3％。通過單因素和4因素3水平試驗，對除蛋白后的海藻糖溶液進行活性炭脫色，活性炭脫色的最佳工藝為：調(diào)節(jié)pH值為4，加入3％的活性炭，60℃下攪拌10min，脫色率達到72.04％，海藻糖含量為8.06％。脫鹽的最佳工藝條件為：1mL/min，pH值6，此時脫色率在90％以上，脫鹽率在97％以上。 4.薄層層析鑒定海藻糖。通過在不同的展開劑中Rf值的測定，確定展開劑為正丁醇：吡啶：水=15：3：2，點樣量1.0ul，硫酸和