骨髓干細(xì)胞移植對急性肺損傷生物學(xué)作用的基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文研究了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性肺損傷模型的生物學(xué)影響和在損傷修復(fù)中的作用及可能的機(jī)制，探討急性肺損傷細(xì)胞治療的可能性。 方法：首先以密度梯度離心法分離、體外培養(yǎng)并擴(kuò)增成體大鼠骨髓MSCs，采用免疫細(xì)胞化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs抗原表達(dá)，同時(shí)檢測MSCs向骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞的分化能力，并用BrdU或DAPI標(biāo)記MSCs；采用細(xì)菌內(nèi)毒素攻擊法建立大鼠急性肺損傷模型，進(jìn)行干細(xì)胞移植治療。將72只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分

2、為3組：(1)正常對照組(C，n=24)，經(jīng)尾靜脈注入0.5ml生理鹽水；(2)單純肺損傷組(L，n=24)：經(jīng)尾靜脈注射LPS(5mg/kg)，然后立即經(jīng)另一條尾靜脈注入0.5ml生理鹽水；(3)急性肺損傷干細(xì)胞移植組(LM，n=24)：經(jīng)尾靜脈注入LPS(5mg/kg)，然后立即經(jīng)另一條尾靜脈注入培養(yǎng)并標(biāo)記的大鼠MSCs(1.0×106溶于0.5ml生理鹽水)。各組在實(shí)驗(yàn)后2h、4h、6h麻醉狀態(tài)下活殺動(dòng)物，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各8只。經(jīng)腹主

3、動(dòng)脈取血、離心，分離血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿中TNF-a、IL-6的含量；收集肺組織測定濕/干重比值、比色法測肺勻漿髓過氧化酶(MPO)活性、制作組織切片以HE和免疫組化法行病理學(xué)檢查。 結(jié)果：1.骨髓MSCs的分離、培養(yǎng)及抗原表達(dá)與多向分化能力：密度梯度離心法能成功分離純化大鼠骨髓MSCs。免疫細(xì)胞化學(xué)示大鼠MSCs表達(dá)CD29和CD44，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34；BrdU標(biāo)記法陽性率約為74％，DAPI標(biāo)記法陽性

4、率可達(dá)90％以上；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，隨傳代次數(shù)的增多，MSCs增殖能力減弱；BrdU標(biāo)記和未標(biāo)記細(xì)胞增殖周期無明顯差異。體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示，MSCs可向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等多向分化。2.LPS致傷作用及MSCs移植對ALI的影響：組織切片HE染色顯示，LM組肺組織炎癥改變較L組減輕。免疫組織化學(xué)染色顯示MSCs移植后在肺內(nèi)歸巢，并有細(xì)胞形態(tài)的變化，但未檢測到細(xì)胞分子表型的改變。與C組相比，LM組、L組在致傷后肺W/D值、組織MPO活性、