中藥當(dāng)歸等誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡及抗耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的： 課題研究中藥復(fù)方當(dāng)歸注射液、馬錢(qián)子堿、士的寧誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的作用，探討該類(lèi)中藥抗白血病多藥耐藥的作用機(jī)制，為研究中藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供理論依據(jù)。 研究對(duì)象： 白血病K562/S、K562/A02細(xì)胞。 方法： 采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)依托泊苷(etoposide,VP16)的細(xì)胞毒作用。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中藥復(fù)方當(dāng)歸注射液等非細(xì)胞毒性劑量單用及與VPl6聯(lián)用作用于白血病細(xì)胞K562/S和

2、K562/A02不同時(shí)間后凋亡率的變化。用Western-blot法檢測(cè)藥物作用不同時(shí)間、細(xì)胞凋亡前后bc1-2蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、VP16對(duì)K562/S和K562/A02細(xì)胞增殖有一定影響，且呈濃度依賴(lài)性。為避免大劑量的誘導(dǎo)劑對(duì)細(xì)胞的殺傷作用而非誘導(dǎo)其凋亡，實(shí)驗(yàn)選用IC<,50>前的濃度即1μg．ml<'-1>和40μg．ml<'-1>的VP16分別作用于K562/S和K562/A02細(xì)胞。 2、中藥復(fù)

3、方當(dāng)歸注射液、馬錢(qián)子堿、士的寧在非細(xì)胞毒性劑量時(shí)，分別作用K562/A02細(xì)胞24、48、72小時(shí)，其凋亡率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)有所增加，72小時(shí)復(fù)方當(dāng)歸注射液組與陰性對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05)。三種中藥與VPl640μg．ml<'-1>聯(lián)用后，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率明顯增加，且呈一定的時(shí)間依賴(lài)性。 3、復(fù)方當(dāng)歸注射液、馬錢(qián)子堿、士的寧在非細(xì)胞毒性劑量時(shí)，分別作用K562/A02細(xì)胞24、48、72小時(shí)，對(duì)bc1-2蛋白表達(dá)影響不

4、明顯，但與VP16 40μg．ml<'-1>聯(lián)用后，可使其表達(dá)呈不同程度的下降，其中以復(fù)方當(dāng)歸注射液組最明顯，且呈時(shí)間依賴(lài)性。 4、三種中藥可促進(jìn)VP16誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡，下調(diào)bcl-2蛋白表達(dá)，是其逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥作用機(jī)制之一。 結(jié)論： 1、中藥復(fù)方當(dāng)歸注射液、馬錢(qián)子堿、士的寧可部分逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞的多藥耐藥性。 2、復(fù)方當(dāng)歸注射液、馬錢(qián)子堿、士的寧逆轉(zhuǎn)多藥耐藥機(jī)制與其通過(guò)下調(diào)抗凋亡蛋白bc1-2的表達(dá)，