墓頭回水提液及其組分誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究及療效評價.pdf

1、目的：探討甘肅地道中藥墓頭回及其主要組分常春藤皂苷元(hederagenin,HG)對慢性髓系白血病細(xì)胞（K562細(xì)胞）的細(xì)胞增殖、凋亡影響及分子機(jī)制，尋找墓頭回及其單體HG誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能的作用靶點(diǎn)。比較兩者對K562細(xì)胞的作用效果，為指導(dǎo)研發(fā)臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：MTT法檢測2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml的墓頭回水提液及其主要組分HG在10umol/l、30umol/

2、l、50umol/l、70umol/l、90umol/l時分別對K562細(xì)胞作用時間為24h、48h、72h時，細(xì)胞存活情況并分別計算出其對K562細(xì)胞的增殖抑制率，同時用Graphpad作圖并得出IC50值。根據(jù)IC50值選擇合適的作用濃度及作用時間，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物作用細(xì)胞后細(xì)胞的凋亡率。通過qRT-PCR檢測用藥后STAT3,c-fos,c-jun基因的相對表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：1.墓頭回水提液及其主要組分常春藤皂

3、苷元可抑制K562細(xì)胞增殖，并有隨藥物濃度加大和作用時間延長抑制作用增強(qiáng)。HG三個時間段的IC50值分別為84.74umol/l、71.75umol/l、48.43umol/l；墓頭回水提液分別為24.77mg/ml、15.88mg/ml、10.73mg/ml。
　　2.常春藤皂苷元對K562細(xì)胞有促凋亡和致死作用。較小濃度（2.5-5mg/ml）墓頭回水提液對K562細(xì)胞促凋亡作用不名顯（P值分別為0.706、0.684，即P＞

4、0.05）；較大濃度（10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml）墓頭回水提液對K562細(xì)胞有明顯促凋亡作用（P值均＜0.001），且促凋亡作用隨墓頭回水提液的濃度加大而增強(qiáng)。
　　3.10mg/ml墓頭回水提液及70umol/l HG作用于K562細(xì)胞48h后，STAT3基因相對表達(dá)量明顯下降（P＜0.001），c-jun、c-fos基因相對表達(dá)量升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.墓頭回水提液及其主要組分HG均可抑